Правила приготовления микропрепаратов

Для приготовления временных микропрепаратов необходимо иметь набор предметных и покровных стекол, препаровальные иглы, бритвы, скальпели, стеклянные палочки для воды, пинцеты, фильтровальную бумагу, некоторые реактивы.

Предметное и покровное стекла промывают водой и протирают досуха мягкой тряпочкой. Тонкий срез растительного объекта помещают в каплю воды на предметное стекло и накрывают покровным стеклом. Если жидкость на препарате выступает за края покровного стекла, то излишек ее удаляют полосками фильтровальной бумаги. Если вода не покрывает всю площадь под покровным стеклом, пипеткой наносят близ края покровного стекла еще каплю, которая сама втягивается под стекло.

При необходимости введения какого-либо красящего реактива воду из-под покровного стекла отсасывают с помощью фильтровальной бумаги, а капельку реактива наносят с противоположной стороны в край покровного стекла.

Красящими реактивами могут быть следующие вещества:

1) йод, растворенный в йодиде калия (для окрашивания зерен крахмала в клетках);

2) хлор-цинк-йод (для окрашивания целлюлозных клеточных оболочек);

3) флороглюцин и соляная кислота (для окрашивания одревесневших оболочек);

4) фуксин (для окрашивания цитоплазмы);

5) гематоксилин (для окрашивания ядер);

6) глицерин (для просветления препарата).

Клетка – основная структурная и функциональная единица тела растения. У одноклеточных растений клетка функционирует как целый организм, у многоклеточных организмов наблюдается дифференциация клеток. Поэтому размеры, форма и строение клеток у таких организмов весьма разнообразны. Взрослая живая растительная клетка состоит из протопласта, окруженного клеточной оболочкой и содержащего неживые включения (запасные вещества и конечные продукты метаболизма).

Протопласт – живое содержимое клетки – состоит из органоидов, или органелл, окруженных гиалоплазмой. Органеллы можно разделить на три группы: двумембранные – ядро, пластиды, митохондрии; одномембранные – эндоплазматический ретикулум (эндоплазматическая сеть – ЭПС), аппарат (комплекс) Гольджи, вакуоль, лизосомы, плазмалемма; немембранные – рибосомы, микротрубочки, микрофиламенты. Гиалоплазма представляет собой непрерывную коллоидную фазу клетки, обладающую определенной вязкостью. Она окружает все органеллы и обеспечивает их взаимодействие. Гиалоплазму с органеллами, за вычетом ядра и пластид, называют цитоплазмой.

Ядро – обязательная часть эукариотической клетки. Это место хранения и воспроизведения наследственной информации. Ядро также служит центром управления обменом веществ и почти всех процессов, происходящих в клетке. Снаружи ядро покрыто двойной мембраной – ядерной оболочкой, пронизанной порами, на краях которых наружная мембрана переходит во внутреннюю. Внутреннее содержимое ядра – кариоплазма с погруженными в нее хроматином и ядрышками, и рибосомами.

Митохондрии – присутствуют во всех живых эукариотических клетках. Их внутренняя мембрана образует выросты в полость митохондрии в виде пластин или трубок, называемые кристами. Пространство между кристами заполнено однородным матриксом. В матриксе встречаются рибосомы и собственная ДНК. Основная функция митохондрий – обеспечение энергетических потребностей клетки путем дыхания.

Пластиды – органеллы, встречающиеся только в растительной клетке. Они представлены хлоропластами (зеленые), хромопластами (желтые, оранжевые, красно-оранжевые) и лейкопластами (бесцветные). Хлоропласты имеют двумемранную оболочку. Внутренняя мембрана вдается в полость хлоропласта немногочисленными выростами. Между выростами находится строма. Выросты и строма формируют в полости хлоропласта сложную систему мембранных поверхностей, отграничивающих особые плоские мешки, называемые тилакоидами или ламеллами. Тиллакоиды образуют стопки – граны. В мембранах тилакоидов сосредоточен главнейший пигмент зеленых растений – хлорофилл и вспомогательные пигменты – каротиноиды.

Эндоплазматическая сеть – трехмерная система вакуолей и канальцев, имеющая форму плоских мешочков или цистерн. Шероховатая ЭПС является местом синтеза белка и покрыта многочисленными рибосомами. Гладкая ЭПС лишена рибосом и служит местом образования липидов.

Вакуоли – полости в протопласте эукариотических клеток. Вакуоли – это производные ЭПС, ограниченные мембраной – тонопластом и заполненные водянистым содержимым – клеточным соком. В молодых растительных клетках вакуоли представляют сиситему канальцев и пузырьков (провакуоли), по мере роста клеток они увеличиваются и сливаются в одну большую вакуоль. Она занимает 70-90% объема клетки, а протопласт располагается в виде тонкого постенного слоя. В основном увеличение размеров клетки
происходит за счет роста вакуоли. В результате возникает тургорное давление и поддерживается упругость клеток и тканей.

Клеточный сок представляет собой водный раствор минеральных солей и различных органических соединений: углеводов (моно-, ди- и полисахариды), белков, органических кислот и их солей (наиболее часто встречаются лимонная, яблочная, янтарная, щавелевая кислоты и их производные), алкалоидов (азотсодержащие соединения, многие из которых – растительные яды, некоторые используются человеком – кофеин, атропин, хинин, морфин, кодеин), танинов (фенольные производные), гликозидов (производные cахаров). Среди последних наиболее интересна группа флавоноидов (это пигменты двух основных цветов: флавоны – желтые и антоцианы – красно-фиолетовые). Наиболее часто флавоноиды содержатся в клетках околоцветника цветков, которым они придают разнообразную окраску. Интересно, что антоцианы способны изменять цвет в зависимости от реакции клеточного сока: при слабокислой – красные, а при нейтральной или основной – сине-фиолетовые. Изменение окраски антоцианов можно наблюдать при раскрывании цветков незабудки, медуницы или окопника шероховатого. У бутонов этих растений венчики розовые, а у раскрывшихся цветков – синие или фиолетовые. Помимо лепестков антоцианы могут содержаться в других частях растения – листьях, стеблях, корнях, придавая им характерный цвет.

Аппарат Гольджи состоит из отдельных диктиосом и пузырьков Гольджи. Диктиосомы – стопки плоских, не соприкасающихся друг с другом дисковидных цистерн, ограниченных мембранами. Пузырьки Гольджи отчленяются от краев диктиосомных пластинок или концов трубок и направляются в сторону плазмалеммы или вакуоли. Пузырьки Гольджи транспортируют образовавшиеся полисахариды.