АВ(IV)
Рис. 3. Определение группы крови по системе АВО (по стандартным эритроцитам)
тн-С и анти-Е. При любом способе определения следует строго придерживаться пнетукцпи, прилагаемых к реагентам.
Способы определения резус-принадлежности крови в лаборатории:
• методом агглютинации с мопоклональными антителами;
• методом конглютинации с применением желагина;
• с помощью реагента антирезус в пробирках с 33% раствором поли-глкжина;
• методом агглютинации в солевой среде с помощью сывороток, содер-
жащих полные резус-антитела;
• с помощью непрямого антиглобулинового тес га
Наиболее оптимальным в настоящее время представляется способ определения резус-принадлежности крови с использованием моноклональ-ных антител. С этой целью применяют цоликлон анти-D-cynep. Одну большую каплю (0,1 мл) цоликлона наносят на планшет. Затем добавляют малую каплю крови (0,01 мл) и перемешивают. Результат оценивают через 3 мин. Наличие агглютинации позволяет сделать заключение, что исследуемая кровь является резус-положптельнон. При отсутствии агглютинации
|
|
ГЛАВА IX. ПЕРЕЛИВАНИЕ КОМПОНЕНТОВ КРОВИ
кровь квалифицируется как резус-отрицательная. Возможность использования планшетного метода и небольшая продолжительность постановки реакции позволяют применять данный способ и у постели больного
Моноклональные антитела могут быть использованы для выявления D-антигена в любых модификациях прямой реакции агглютинации на плоскости, в пробирках, в мпкроплате.
Цоликлон анти-D-cynep представляет собой прозрачную жидкость бледно-желтого цвета. Выпускается во флаконах (ампулах) объемом 1, 2, 5 или 10 мл (соответственно 10,20, 50 или 100 доз). В качестве консерванта применяется 0,1% раствор натрия азида (NaN3). Срок хранения при температуре 2-8 °С-2 года. Вскрытую ампулу можно хранить в закрытом виде в течение месяца. Титр цоликлона достигает 1:1024.
Цоликлон содержит полные анги-D моноклональные антитела, принадлежащие к иммуноглобулинам класса М и не содержит антител иной специфичности. Поэтому реагент может быть использован для выявления D-антигена в эритроцитах любой группы крови. Определение D-антигена может производиться как в крови, стабилизированной с помощью консервантов, так и в крови без консерванта. Для получения более четкой реакции агглютинации целесообразно использование высокой концентрации эритроцитов.
Недостатком данного метода является то, что IgM антитела не вызывают агглютинации некоторых образцов эритроцитов со слабо выраженным D-ангигеном или с частичным D. Поэтому кровь, которая при исследовании моноклоиальным анти-D реагентом была определена как D-отрица-тельная, нуждается в дополнительном тестировании методом конглютпна-ции с желатином или применением непрямого аптиглобулинового теста.
|
|
Метод конглютинации с применением желатина основан на реакции, происходящей между эритроцитами, которые содержат резус-антигены, и антителами к резус-фактору сыворотки.
Для проведения метода необходимы:
• стандартные сыворотки, содержащие антитела к заведомо известно
му типу резус-фактора [aHTii-Rh0D, при необходимости anni-rlV(C),
анти-гЬ"(Е) и др.], двух серий;
• стандартные резус-положительные и резус-отрицательные эритроциты;
• физиологический раствор натрия хлорида;
• Ю% раствор желатина.
Определение проводят с двумя различными сериями сывороток анти-Рсзус, поэтому в штатив устанавливают 2 ряда пробирок. Стандартные сыворотки должны быть одиогруппнымн с исследуемой кровью.
ГЛАВА 1\. ПЕРЕЛИВАНИЕ КОМПОНЕНТОВ КРОВИ
В качестве контроля используют резус-положительные и резус-отрица-тельные эритроциты 0(1) группы или одной группы с исследуемой кровью, а также проведение реакции на возможную аутоагглютинацию без добавления стандартной сыворотки.
На дно каждой пробирки вводят по 1 капле исследуемых эритроцитов, по 1 капле раствора желатина и по 1 капле сыворотки антирезус. Пробирки встряхивают и помещают в водяную баню при 46-48 °С на 10 мин. После извлечения пробирок из водяной бани в них доливают 5—10 мл физиологического раствора (до розового цвета). Пробирки переворачивают 2-3 раза в целях смешивания содержимого и оценивают результат.
При отсутствии агглютинации в пробирке видна равномерно окрашенная гомогенная жидкость, при наличии - «хлопья». Сначала проверяют контрольные образцы, подтверждающие специфичность и активность сыворотки антирезус и желатина, т.е. наличие агглютинации в пробирке с резус-положительными эритроцитами и отсутствие ее с резус-отрицательными. Затем аналогично оценивают исследуемые образцы. Если в пробирках имеется агглютинация, следовательно, эритроциты содержат соответствующие резус-антигены
В настоящее время принято считать, что только наличие резус-фактора D обусловливает принадлежность крови к резус-положительной группе. Итак, при наличии агглютинации со стандартной сывороткой анти-D кровь признается резус-положительной. При наличии агглютинации со стандартными сыворотками анти-С, анти-Е и т.д., а также при отсутствии агглютинации кровь относится к резус-отрицательной группе.
3.3. ОШИБКИ ПРИ ОПРЕДЕЛЕНИИ ГРУПП КРОВИ ПО СИСТЕМАМ АВО И RH-HR
Как уже отмечалось, определение групп крови необходимо производить согласно «Инструкции по определению ipynn крови АВО», которая должна находиться на рабочем месте у каждого сотрудника, выполняющего данное исследование. Ошибки, как правило, обусловлены несоблюдением данной инструкции.
Возможны только два варианта неправильной интерпретации полученных результатов, но оба они могут привести к весьма трагическим последствиям. В первом случае не выявляется агглютинация при ее наличии, во втором - она выявляется при отсутствии. Основные причины ошибок:
ГЛАВА IX. ПЕРЕЛИВАНИЕ КОМПОНЕНТОВ КРОВИ
1. Недостаточная подготовленность рабочего места:
• слабая освещенность;
• неблагоприятный темперлурньш режим (менее 15° или более 25 °С) - велика опасность выявления ложной агглютинации, обусловленной «Холодовым» склеиванием эритроцитов или быстрым высыханием исследуемой капли с образованием «монетных столбиков» эритроцитов;
• применение нестандартных пластин с низкой смачиваемой поверх-
ностью;
• недостаточное количество палочек, пипеток, реагентов.
2. Небрежность в выполнении работы:
• отсутствие маркировки и нарушение порядка нанесения стандартных сывороток, эритроцитов, цоликлонов;
|
|
• нанесение различных реагентов одной пипеткой или смешивание различных капель одной палочкой;
• нарушение пропорции реагент- кровь;
• при определении АВО группы по стандартным сывороткам не добавление физиологического раствора в капли, где наступила аг-iлютннация, или добавление в лунки, где она еще не наступила, не проведение реакции со стандартной сывороткой группы AB(IV).
3. Изменения активности или специфичности стандартных реагентов:
• изготовителем не обеспечены необходимые параметры,
• нарушение условий хранения реагеЕггов (несоответствие температурного режима, нарушение герметичности, инфицирование);
• использование реагентов с истекшим сроком годности.