Задание 2. Сложные методы окраски. Результаты отразить в следующей таблице:
| Материал
| Ход исследования
| Результат
|
| Смесь из двух культур для окраски (Грам+ и Грамм– бактерии)
| а) приготовление препарата;
б) окраска по Граму;
в) микроскопия
|
|
| Культура спорообразующих бактерий
| а) приготовление препарата, окраска по Ожешко и простым методом;
б) микроскопия
|
|
| Мокрота больного (для выявления кислотоустойчивых микобактерий) или демонстрационный препарат.
Работа с клиническим материалом проводится под руководством преподавателя
| а) приготовление препарата, окраска по Циль-Нильсену;
б) микроскопия;
в) зарисовка
|
|
| Культура бактерий рода Klebsiella,демонстраци-онный препарат, окрашен-ный по Бурри-Гинса
| а) приготовление препарата, окраска по Бурри-Гинсу;
б) микроскопия;
в) зарисовка
|
|
Характеристика метода Грама представлена в следующей таблице:
| Цель применения
| Для отличия грамположительных и грамотрицательных, что является важным таксономическим признаком
|
| Реактивы:
- красящие раст-воры;
- протрава;
- дифференциру-ющее вещество
| 1. Карболовый генцианвиолет или фильтро-вальная бумага, пропитанная раствором этой краски.
2. Водный раствор фуксина или пропитанная раствором карболового фуксина фильтровальная бумага.
3. Раствор Люголя (300 мл дистилированной воды 1,0 йода и 2,0 KI).
4. Этиловый спирт
|
| Способ фиксации
| В пламени горелки
|
| Этапы окраски
| 1. На фиксированный мазок поместить филь-тровальную бумагу, пропитанную генцианвио-летом, смочить ее водой, выдержать 2–3 мин.
2. Снять бумагу, слить с препарата оставшу-юся краску и налить раствор Люголя на 1 мин.
3. Слить раствор Люголя, слегка просушить препарат. Провести дифференциацию спиртом, налив спирт на мазок.
4. Тщательно промыть препарат водой.
5. Дополнительно докрасить препарат с помощью карболового фуксина в течение 2 мин.
6. Промыть водой, просушить
|
| Сущность метода
| При окраске генцианвиолетом и последующем воздействии раствором Люголя образуется комплексное соединение краски с йодом, которое при дифференциации спиртом удерживается в клетках грамположительных бактерий (остаются фиолетовыми) и удаляются из грамотрицательных (при дополнительной ок-раске фуксином приобретают красный цвет)
|
| Результат (описа-ние микроскопической картины)
| Например: грамположительные микрококки, стафилококки (сине-фиолетового цвета), грамотрицательные палочки (красного цвета)
|
По этой же форме ведется запись и других сложных методов окраски. Схемы заполняются дома при подготовке к занятию.
В следующей таблице представлены методы определения подвижности бактерий:
| Прямой
| Косвенный
|
| Приготовление и мик-роскопия из живых культур микроорганизмов:
1) висячая капля (световая и фазово-контрастная микроскопия);
2) раздавленная капля
| Культивирование в полужидких средах (0,4 %-й агар). Засев производят:
а) уколом прямой петли до середины агарового слоя. В процессе роста подвижные бактерии мигрируют от линии инокуляции, образуя диффузную мутную зону, тогда как неподвижные растут только по ходу петли;
б) в полужидкую среду помещают открытую с обоих концов стерильную стеклянную трубочку, в которую вносят инокулят. Подвижные бактерии мигрируют вниз, выходят из нижнего конца трубочки и начинают двигаться вверх к поверхности среды, где усиленно растут. Этот метод пригоден и для селекции высокоподвижных штаммов, например, для приготовления Н-Аг
|
2015-02-27
518
