Фазово – контрастный метод

Метод применяется для наблюдения малоконтрастных объектов, он основан на использовании разности фаз, которая образуется при прохождении света через различные структуры исследуемого объекта. Интенсивность световой волны, проходящей через прозрачный объект, почти не изменяется, но фазы претерпевают изменения, зависящие от толщины объекта и его показателя преломления. Прозрачные объекты называются дефазирующими. Увидеть детали таких объектов обычным образом невозможно. В биофизических исследованиях такие объекты иногда окрашивают, однако при этом могут изменяться их свойства и жизнеспособность. На пути светового пучка устанавливается прозрачная среда, в которой имеется прозрачное включение, например, бактерия (рис. 3). Проходящий пучок света разделится на две части, первая часть пройдет через прозрачный объект и линзой сфокусируется на участке Ф фокальной плоскости F (см. рис. 4. а, линия 1). Другая часть будет дифрагировать на неоднородности обекта и соберется линзой в точке А плоскости I (см. рис. 4. а, линия 2). Кривая 3 является результатом дифракции света на бактерии. Разность фаз кривых возникает из-за разных показателей преломления сред.

Глаз в плоскости I не различает волны 1и 2, так как их интенсивности одинаковые, а на различие фаз глаз не реагирует. Необходимо фазовую разность преобразовать в амплитудную. Для этого в плоскости F ставят небольшую круглую фазовую пластинку, изменяющую фазу волны 1 на , то волны 1 и 3 окажутся либо в фазе, либо в противофазе. В этом случае контраст бактерии будет усилен (рис. 4. б).