Опыт № 1 Влияние адреналина и ацетилхолина на фагоцитарную (поглотительную) активность лейкоцитов крови

В 3 пронумерованные пробирки последовательно вносят 1 объём раствора гепарина, 2 объёма крови, 1 объём смыва суточной культуры стафилококка (1 объём соответствует 30 делениям капилляра Панченкова). Гепарин, кровь и культуру стафилококка набирают тремя различными капиллярами.

Содержимое пробирок тщательно перемешивается, после чего в 1-ую пробирку добавляют 2 капли раствора адреналина 1:10⁸, во 2-ую – 2 капли ацетилхолина 1:10⁵, в 3-ю – 2 капли физиологического раствора (контроль).

Все три пробирки одновременно ставят в термостат, нагретый до 37°С. Через 15 минут содержимое пробирок вновь тщательно перемешивают, из каждой пробирки делают мазки на предметных стеклах, обозначив на них номера пробирок. Высушив мазки на воздухе, фиксируют их в смеси Никифорова 30 минут или в метиловом спирте – 3 минуты. Затем мазки окрашивают в течение 30 минут краской Романовского-Гимза. По истечении этого времени краска смывается водопроводной водой, и мазки высушиваются на воздухе.

Пользуясь иммерсионной системой микроскопа, высчитать для каждого мазка: 1) фагоцитарный индекс, 2) фагоцитарное число.

Для этого необходимо сосчитать 100 нейтрофильных лейкоцитов и моноцитов, включая в это число фагоциты как поглотившие, так и не поглотившие микробы. Активные фагоциты, поглотившие микробы, обозначаются цифрами, соответствующими количеству кокков, находящихся в них; интактные фагоциты обозначаются нулями.

Фагоцитарный индекс указывает на количество микробов, приходящееся в среднем на 1 фагоцит. Вычисляется он так: сумма всех поглощенных стафилококков делится на количество всех сосчитанных фагоцитов, т.е. на 100.

Фагоцитарное число равно количеству фагоцитов, поглотивших микробы из 100 сосчитанных, т. е. фагоцитарное число – это процент активных фагоцитов.

Отметить изменение показателей фагоцитарной активности лейкоцитов крови в зависимости от добавления в пробирку адреналина или ацетилхолина и сделать соответствующие выводы.

1. Какие стадии фагоцитоза вы наблюдали при просмотре мазков?

2. Как и почему изменяются количественные показатели фагоцитоза при воздействии ацетилхолина и адреналина?

3. Какие бактерицидные механизмы включаются в фагоцитах при захвате микроорганизмов в данном эксперименте?

4. Какое значение для клиники может иметь оценка фагоцитарной активности лейкоцитов?

Занятие 7. Аллергия. Анафилаксия