Готовят два раствора:
1. 1,0г гематоксилина растворяют в 100мл 96º спирта. Раствор созревает на свету около месяца.
2. Официальный раствор полуторахлористого железа 4,0мл, соляная кислота (удельный вес 1,15-1,17) 1,0мл, вода дистиллированная 95,0мл. Официальный раствор полуторахлористого железа представляет собой 50% водный раствор хлористого железа (FeCI3 ˟ 6H2O – желто-бурая масса).
Перед работой обо раствора смешивают в равных частях.
Окрашивание срезов гематоксилин – эозином. Замороженные срезы, за исключением случаев окраски на липиды, помещают для обезжиривания в 70º и 96º спиртах. Парафиновые срезы для удаления его проводят через 2 порции ксилола по 1-2 минуты, затем через спирты убывающей концентрации и переносят в воду.
Схема окрашивания гематоксилин – эозином
Прогрессивным методом.
1. Срезы помещают в раствор гематоксилина (Карраччи и другие) на 3-5 минут.
2. Срезы переносят в обычную воду до приготовления синеватого цвета. При этом ядра клеток, окрашенные в красновато-фиолетовый цвет в щелочной среде воды, приобретают сине-фиолетовый цвет. Синие ядра клеток становятся более контрастными. Затем срезы переносят в дистиллированную воду на 3-5 минут.
|
|
3. Срезы помещают в 1% раствор эозина на 1-3 минуты.
4. Отмывают краситель 1-2 и более минут дистиллированной водой.
Схема окрашивания гематоксилин – эозином
Регрессивным методом.
В этом методе используются легко перекрашивающие растворы гематоксилина Бемера, Делафильда, Эрлиха (рецепты их приготовления имеются в пособиях по гистологической технике).
Схема окрашивания.
1. Окраска срезов в растворе гематоксилина 2-5 минут.
2. Промывка в дистиллированной воде 1-6 секунд.
3. Срезы переносят в 0,5-1% раствор соляной кислоты на 70º спирте 3-30 секунд.
Срезы при дифференцировке начинают краснеть. При передержке в солянокислом спирте может произойти полное исчезновение краски. Затем красят эозином.
Метод окрашивания под ван Гизон.
Этот метод окрашивания дает цветное окрашивание разных гистоструктур. Перед окраской растворы Вайгерта1 и 2 смешивают поровну. Получается густая темно-фиолетовая жидкость. Нужно иметь в виду, что в готовом виде краска быстро портится из-за наличия сильных окислителей.
Вторую краску –пикрофуксин готовят из насыщенного водного раствора пикриновой кислоты и 1% водного раствора кислого фуксина.
Берут 100,0 мл пикриновой кислоты и смешивают с 10 мл фуксина. Образуется стойкая смесь гранатового цвета, сохраняющаяся месяцами.