Гомологичные белки — белки, которые выполняют одну и ту же функцию, но различаются по первичной структуре (например, локализованы в различных органах или образуются при патологических состояниях). Например, HbA (содержит Glu) Þ HbS (содержит Val) при серповидноклеточной анемии.
Метод пептидных карт (отпечатков пальцев),предложенный Ингремом.
Этапы:
1) оба анализируемых белка расщепляют на фрагменты (пептиды);
2) смесь пептидов каждого белка наносят в виде пятна на угол листа хроматографической бумаги;
3) проводят электрофорез в горизонтальном направлении;
4) проводят распределительную хроматографию в вертикальном направлении;
5) полученные карты окрашивают и сравнивают;
6) различающиеся пептидные пятна выделяют и анализируют.
УСТАНОВЛЕНИЕ АК-ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ БЕЛКА
I. Определение N-концевой АК
1. Метод Сэнжера (ФДНБ — фтординитробензол — связывается с N-концевой АК с образованием соединения желтого цвета).
2. Метод Эдмана (используется ФИТЦ — фенилизотиоцианат, который также связывается с N-концевой АК с образованием соединения оранжевого цвета).
|
|
3. Взаимодействие N-концевой АК с дансилхлоридом с образованием флуоресцирующего соединения.
4. Ферментативный метод (использование аминопептидаз — это ферменты которые избирательно отщепляют N-концевые АК, например, аланиновая аминопептидаза).
II. Определение С-концевой АК
1. Метод Акабори (гидразин разрушает все пептидные связи и реагирует со всеми АК, кроме концевой; концевую АК определяют после обработки смеси ФДНБ).
2. Ферментативный метод (карбоксипептидазы А отщепляют ароматические С-конце-вые АК, карбоксипептидазы В — основные С-концевые АК).
III. Определение АК-последовательности
1. Используют прибор секвенатор, предложенный Эдманом.
2. Избирательный гидролиз.