Прежде чем приступить к работе по определению группы крови, необходимо ознакомиться с этикетками стандартных сывороток всех четырех групп. Затем провести макроскопическую оценку пригодности сывороток. На этикетках имеются следующие сведения:
• учреждение, в котором изготовлена сыворотка;
• групповая принадлежность сыворотки с обязательным указанием агглютининов,
• номер серии,
• титр агглютининов, он должен быть не менее 1:32,
• срок годности сыворотки (число, месяц, год),
• наличие цветных полос: у группы 0(I) - полос нет, у группы А(II) - две синие, у группы B(III) - три красные, у группы АВ(IV) - четыре желтые.
Стандартные сыворотки выпускаются с определенной цветной маркировкой: I(0) - бесцветная, II(А) - голубая, III(B) - красная, IV (АВ) - желтая. Использование красок не влияет на свойства сывороток (титр и срок годности).
Макроскопически сыворотки должны быть прозрачными, допускается небольшая опалесценция. При наличии помутнения или хлопьев сыворотка считается не пригодной к определению группы крови. Срок годности стандартной сыворотки равняется шести месяцам с момента ее расфасовки. По истечении шести месяцев ее можно проверить и, если она не утратила своих свойств, то на СПК срок годности продляется еще на два месяца.
Определение группы крови проводят на специальных эмалированных металлических пластинках со смачиваемой поверхностью, на которых вверху обозначены группы крови, а под ними размещены два ряда лунок для капель сывороток и крови. Слева имеется разметка серий сывороток. При отсутствии специальных пластин определение группы крови можно осуществлять на обычных фарфоровых тарелочках, на которых делается аналогичная разметка. На пластинках сверху необходимо написать фамилию и инициалы больного, у которого определяется группа крови.
На сухую пластинку, под соответствующие обозначения групп крови, наносят в лунки по одной большой капле (0,1 мл) стандартной сыворотки (титр 1:32) двух серий; капли второй серии сывороток располагают во второй ряд. Всего получается шесть капель. Сыворотку берут из каждой ампулы своей пипеткой и опускают ее в ту же ампулу с сывороткой. Исследуемую кровь, взятую из пальца или пробирки, размещают в виде крупной капли на пластинке справа. Из нее забирают каплю крови величиной в 10 раз меньшую (0,01 мл), чем капля сыворотки. Обычно это делают стеклянной палочкой, погружая ее в каплю исследуемой крови, а затем размещают эту маленькую каплю рядом с каплей стандартной сыворотки. Перемешивание капель крови с сывороткой производят отдельными для каждой капли стеклянными палочками. Можно перемешивать капли одной палочкой, но в этом случае необходимо, после перемешивания каждой капли, промывать палочку в стакане с изотоническим раствором хлористого натрия и насухо вытирать.
После размешивания капель пластинку слегка покачивают, затем оставляют в покое на одну - две минуты, потом снова покачивают. Через пять минут к капле смеси сывороток и эритроцитов, в которых произошла агглютинация, добавляется по одной капле изотонического раствора хлористого натрия для устранения псевдоагглютинации, после чего можно делать заключение о группе крови.
Если агглютинация произошла, то в каплях смеси сывороток и крови видны невооруженным глазом мелкие красные комочки (агглютинаты), состоящие из склеенных эритроцитов. Иногда эти комочки сливаются в более крупные и выглядят в виде хлопьев неправильной формы, а сыворотка становится обесцвеченной.
Если в каплях агглютинация не произошла, то смесь сыворотки и крови остается равномерно окрашенной в красный цвет и в ней не обнаруживаются агглютинатов. С помощью стандартных сывороток мы устанавливаем наличие или отсутствие в исследуемой крови агглютиногенов А и В. В результате такого исследования возможны четыре различных комбинации положительных и отрицательных реакций (таблица 3):
1. Если сыворотки всех трех групп дали отрицательную реакцию, то исследуемая кровь принадлежит к первой группе.
2. Наличие агглютинации с сыворотками первой и третьей групп свидетельствует о принадлежности исследуемой крови ко второй группе.
3. Проявление реакции агглютинации с сыворотками первой и второй групп свидетельствует о принадлежности крови к третьей группе.
4. Если сыворотки всех трех групп крови дали реакцию агглютинации (и она является специфической), то исследуемая кровь принадлежит к четвертой группе. В последнем случае, для исключения неспецифической агглютинации исследуемых эритроцитов, необходимо провести контрольное исследование со стандартной сывороткой четвертой группы, и только при получении отрицательного результата, можно утверждать, что исследуемая кровь принадлежит к четвертой группе.
Таблица 3. Определение группы крови при помощи стандартных сывороток
|
Примечание: Знаком (+) обозначена агглютинация, знаком (-) – ее отсутствие.
Результат определения группы крови записывается в правом верхнем углу лицевой страницы истории болезни с указанием даты и подписи врача, производившего определение, или на этой же странице заполняется соответствующая строка.