2015-04-30
463
Широко сегодня применяется также и метод ферментативного секвенирования путём терминации (остановки синтеза) цепи (рис. 8.22а).В основе метода лежит принцип репликации комплементарной цепи ДНК на одноцепочной матрице при происходящем в различных местах ДНК обрыве синтеза, т. е. детерминации роста цепи.
Поскольку в основе секвенирования лежит процесс репликации ДНК, то основным ферментом является ДНК-полимераза. В присутствии одноцепочной ДНК-матрицы, короткого полинуклеотидного праймера и нуклеотидов по принципу комплементарности будет происходить синтез второй цепи ДНК. При этом удлинение цепи будет происходить до тех пор, пока вместо дезоксинуклеотида не присоединится дидезоксинуклеотид. Присоединение последнего приведёт к остановке синтеза.
Рис. 8.22. Определение нуклеотидной последовательности
