2015-04-30
2210
Методы исследования наследственного материала (нуклеиновых кислот) постоянно совершенствуются, при этом для анализа структуры ДНК требуется определённое количество клеточного материала. Например, даже при использовании такого высокочувствительного метода, как фиргерпринт ДНК т. е. высокоспецифичных гибридизационных полос на электрофореграммах, образующиеся как результат полиморфизма длины рестрикционных фрагментов геномной ДНК, требовалось наличие капли крови или другого эквивалентного количества образца животной или растительной ткани, содержащих в клетках достаточное для анализа количество копий ДНК.
Сегодня ситуация радикально изменилась благодаря появлению метода, который был разработан Кэри Мюллисом. Этот метод получил название полимеразной цепной реакции (ПЦР) и стал неотъемлемой процедурой, освоенной во всех генно-инженерных лабораториях мира. Использование методики ПЦР позволяет амплифицировать (размножать) ДНК или её фрагмент in vitro, увеличивая количество копий в миллионы раз за несколько часов.
|
|
|
ПЦР осуществляют в пробирке с помощью специального термостабильного фермента ДНК-полимераза (Tag-полимераза), набора всех четырёх нуклеотидов А, Т, Г и Ц и коротких олигонуклеотидных затравок – праймеров. Праймеры – это короткие, длиной в 20-30 нуклеотидов, одноцепочные фрагменты ДНК, комплементарные 3’- концевым последовательностям копируемой ДНК-матрицы. Благодаря праймерам ограничивается фрагмент ДНК, который будет скопирован Tag-ДНК-полимеразой, присоединяющейся к 3’- концам праймеров и достраивающей их до заданной длины. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) протекает в три стадии (рис. 8.23).
Рис. 8.23. Последовательность стадий размножения
