Лабораторная работа 3-4

Оценка фагоцитарной активности лейкоцитов человека

Последовательность выполнения операций:

• кровь из пальца (или из венозной крови до контакта с антикоагулянтом) в количестве 0,1 мл помещают на тщательно вымытое обезжиренное покровное стекло;

• покровное стекло выдерживают во влажной камере при 37 °С 45 мин, после чего образовавшийся сгусток осторожно удаляют пинцетом;

• покровное стекло с прикрепленными нейтрофилами промывают в растворе Хенкса;

• на покровное стекло наносят фагоцитируемую взвесь и снова выдерживают во влажной камере (клетками вверх) при 37 °С в течение 30 мин (в качестве объекта фагоцитоза могут быть использованы частицы латекса, опсонизированный зимозан, S. aureus). На покровное стекло осторожно наносят 0,2 мл суточной культуры лабораторного штамма S. aureus в концентрации 10⁸ бактерий на 1 мл;

• после инкубации в течение 60 мин стекло промывают в растворе Хенкса для удаления непоглощенных частиц и высушивают;

• высушенный препарат фиксируют 5 мин в метаноле. Окрашивают гематоксилином Караччи (4 мин) с докраской эозином (30 с);

• после проведения через гистологическую батарею спирт-ксилол препарат заключают в канадский бальзам;

• учет фагоцитарной активности осуществляют, определяя процент нейтрофилов с фагоцитированным материалом (фагоцитарное число) и количество поглощенных частиц из расчета на один нейтрофил (фагоцитарный индекс). На каждом стекле для этой цели исследуют не менее 200 клеток.