№№ пробирки | ||||||||||
Разведение фага | 10-1 | 10-2 | 10-3 | 10-4 | 10-5 | 10-6 | 10-7 | 10-8 | 10-9 | 10-10 |
Ингредиенты | ||||||||||
МПБ, мл | 4,5 | 4,5 | 4,5 | 4,5 | 4,5 | 4,5 | 4,5 | 4,5 | 4,5 | 4,5 |
Испытуемый фаг, мл | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 |
Взвесь микробов | 1 к | 1 к | 1 к | 1 к | 1 к | 1 к | 1 к | 1 к | 1 к | 1 к |
Результаты | - | - | - | - | - | - | - | + | + | + |
Примечание: «-» – отсутствие роста культуры; «+» – рост культуры.
Титр фага – 10-7.
2. Титрование фага по методу Грациа.
Этим методом можно одновременно с титром фага определить количество фаговых частиц в исследуемом материале. Метод основан на том, что каждая частица фага, фиксированная агаром, дает зону просветления (лизиса) на чашке с газоном чувствительного к нему микроба.
Титруемый фаг разводят от 10-1 до 10-9 (как в предыдущем опыте). В пробирки с расплавленным 0,7% мясо-пептоным агаром вносят 1 мл фага из каждого разведения и 0,1 мл смыва 4-х часовой культуры, чувствительной к фагу. Культуру и фаг тщательно перемешивают в агаре, после чего содержимое выливают на чашки Петри с 1,5% мясо-пептонным агаром. После застывания агара чашки переворачивают, подписывают и помещают в термостат на 24 часа. При учете подсчитывают количество стерильных пятен (негативных колоний фага). Учитываются только те чашки, на которых колонии фага четко отделены друг от друга. Результаты записывают следующим образом:
|
|
Таблица 29