2015-05-13
911
Исследование микротомных препаратов сыграло огромную роль в развитии цитологии и эмбриологии растений. Многие отечественные ученые, начиная с С.Г. Навашина, сделали очень ценные наблюдения на постоянных микротомных препаратах. Эти препараты являются прекрасным демонстрационным материалом и могут храниться долгие годы. На тонких срезах толщиной 10-22 мкм можно изучать митоз и мейоз, подсчитывать число хромосом, наблюдать проникновение пыльцевых трубок в зародышевый мешок, двойное оплодотворение, развитие зародыша, эндосперма и т. д.
Техника приготовления окрашенных микротомных препаратов для растений введена В.И. Беляевым. Объекты, предназначенные для таких исследований, претерпевают сложную обработку. Ниже приведена последовательность обработки исследуемого материала по Юрцеву.
1. Подготовка материала к фиксации.
2. Фиксирование материала водным (24 ч) или спиртовым фиксатором (30 мин—12 ч).
3. Промывка фиксированного материала:
| после водных фиксаторов | после спиртовых фиксаторов |
| в проточной воде 1-3 ч | в 3 сосудах с 80%-м р-ром этилового спирта по 1-2 ч в каждом (запах уксусной кислоты должен исчезнуть) |
4. Полное обезвоживание промытого материала;
|
|
|
5. Пропитывание материала растворителями парафина (хлороформом, ксилолом или бензолом):
6. Пропитывание материала парафином (замещение промежуточной жидкости парафином): в хлороформ (или ксилол) добавляют парафин и эту смесь помещают в термостат при температуре 56-57 °С до полного испарения хлороформа (или ксилола) и замещения его в материале парафином в течение 3-6 сут.
7. Заливка материала в парафин (материал, залитый в парафин, можно хранить очень долго).
8. Изготовление блоков из материала, пропитанного парафином.
9. Получение срезов при помощи микротома.
10. Наклейка срезов на предметные стекла.
11. Просушивание препарата при 40-45°С (стекла со срезами можно хранить очень долго, если оберегать их от пыли и высокой температуры).
12. Удаление парафина, из срезов ксилолом.
13. Удаление ксилола из срезов спиртом.
14. Удаление спирта из срезов дистиллированной водой.
15. Окрашивание препаратов (иногда с предварительным протравливанием) и дифференцировка.
16. Обезвоживание окрашенных срезов 96%-м раствором и 100%-м этиловым спиртом.
17. Замещение спирта в срезах на ксилол (одновременно происходит осветление срезов ксилолом).
18. Заключение срезов в канадский бальзам.
19. Просушивание препаратов и подчистка.
20. Этикетирование препаратов.
21. Изучение препаратов под микроскопом.
