Антигенами называются вещества, вызывающие при введении в кровяное русло животных образование антител, с которыми они вступают в специфическую реакцию. Встречаются еще вещества, носящие названия неполных антигенов, или гаптенов, которые не способны вызывать у животных образование антител, но могут вступать в реакцию с антителами, образованными против антигенов, имеющих с ними структурное сходство.
Белки относятся к активным антигенам. Вирусы, состоящие в основном или исключительно из нуклеопротеида и содержащие, следовательно, белок, также являются антигенами (Дворак, 1927; Честер, 1936; Зильбер, 1956).
При введении вирусного препарата в кровяное русло кролика или другого лабораторного животного в тканях последнего начинают образовываться специфические антитела, попадающие в кровь, где они выполняют защитную функцию, соединяясь с антигеном и нейтрализуя его. Для повышения концентрации антител в крови животное подвергается нескольким последовательным инъекциям антигена, интервал между которыми составляет несколько дней. Для получения антисыворотки к вирусу животное обескровливается через 8—10 дней после последней инъекции. Собранная кровь должна свернуться, после чего центрифугированием отделяется сыворотка.
|
|
Ввиду трудности получения очищенных препаратов некоторых вирусов для инъекции можно использовать экстракты из зараженных тканей. В таком случае наряду с вирусом в сосуды животного инъецируются также нормальные белки тканей, что должно привести к появлению в крови различных антител. Антисыворотка, получаемая этим методом, является специфической, и содержащиеся в ней антитела реагируют только с определенным антигеном вируса.
Для идентификации вирусов в целях диагностики используется ряд серологических реакций.
Реакция преципитации или агглютинации. При соединении раствора антигена с антисывороткой образуется нерастворимый комплекс антиген — антитело. Выпадает осадок, или преципитат, появление которого свидетельствует о присутствии в смеси антигена. Если реакция происходит со взвесями более крупных частиц, например бактерий, она носит название агглютинации.
Скорость реакции зависит от частоты взаимных столкновений частиц антител и антигена и увеличивается при подогревании, встряхивании или усилении конвекционных токов.
Большое значение имеет количественное соотношение между антигеном и антителом. При неблагоприятном соотношении выпадение осадка задерживается, а при большом избытке одного из компонентов, особенно антигена, преципитация вообще может отсутствовать. Для устранения возможных неудач испытание реакции проводится в ряде пробирок, где концентрация сыворотки постоянна, а антиген вносится в разных разведениях.
|
|
Дунин и Попова (1937) разработали капельный метод серодиагностики фитопатогенных вирусов. На предметное стекло наносится капля нормальной сыворотки и капля антисыворотки. К каждой из них добавляется по капле испытуемого растительного экстракта. Если в экстракте содержится соответственный вирус, в капле с антисывороткой образуется осадок. Нормальная сыворотка служит в качестве контроля, поскольку сок некоторых растений при соединении с нормальной сывороткой может давать неспецифическую реакцию с образованием осадка. Результат пробы считается положительным, когда осадка нет в контрольной капле, и он отчетливо заметен в капле с антисывороткой. В присутствии хлоропластов визуальность реакции повышается, так как образование преципитата приводит к соединению хлоропластов в сгустки.