III) По применяемой технике эксперимента хроматография делится на

1. тонкослойную (ТСХ) или бумажную

2. колоночную

1. В ТСХ в качестве твердой фазы используют силикагель (xSiO₂·yH₂O), оксид алюминия (Al₂O₃), целлюлоза и другие полимеры, которые тонким слоем наносят на пластинку.

Вместе с подвижной жидкой фазой по неподвижной фазе перемещаются нанесенные вещества с разными скоростями, зависящими от их сорбционных свойств. Для идентификации веществ используются соответствующие соединения – свидетели, а также значения фактора относительного удерживания R_f – отношения пути, пройденного веществом, к пути, пройденному подвижной фазой от линии старта до линии фронта:

ТСХ включена в качестве стандартного метода анализа лекарственных препаратов в Государственную фармакопею России.

Бумажная хроматография по технике исполнения аналогична ТСХ. Неподвижной фазой является вода, входящая в состав бумаги.

2. Колоночная хроматография

В верхнюю часть колонки с сорбентом наносят анализируемую смесь и через слой сорбента медленно пропускают подвижную фазу. Этот процесс называется элюированием. Из-за различных сорбционных свойств каждый компонент смеси имеет свое время удерживания, т.е. время прохождения через колонку. Порции элюента собирают, подвижную фазу испаряют и получают чистый компонент.

IV) По механизму разделения хроматографию подразделяют на:

1) Адсорбционная хроматография – основана на использовании неодинаковой способности разделяемых компонентов вступать в специфическое взаимодействие с поверхностью адсорбента – НФ – за счет адсорбции.

2) Распределительная хроматография – основана на использовании различий в коэффициентах распределения разделяемых компонентов между ПФ и НФ, представляющей собой жидкость. За коэффициент распределения принимают отношение равновесной концентрации хроматографируемого компонента в более полярной фазе (с большей диэлектрической проницаемостью) к равновесной концентрации того же компонента в менее полярной фазе (с меньшей диэлектрической проницаемостью).

3) Ионообменная адсорбция – основана на использовании различной способности ионов разделяемых компонентов, находящихся в ПФ (обычно - это жидкость), к обмену с ионами НФ.

4) Хемихроматография – основана на использовании различной способности компонентов разделяемой смеси вступать в те или иные химические реакции с реагентами, входящими в состав НФ. При этом различают такие виды хроматографии как осадочная, окислительно-восстановительная, лигандная (комплексообразовательная) и биоспецифическая.

5) Эксклюзионная ( ситовая, проникающая ) хроматография – основана на использовании различий между размерами частиц разделяемых компонентов и размерами пор НФ, которая представляет собой сорбент – пористое вещество. Сорбенты здесь играют роль молекулярных сит; они проницаемы только для частиц определенных размеров. Мелкие частицы проникают в поры сорбента и удерживаются там, а крупные уносятся вместе с ПФ, не удерживаясь на сорбенте. Происходит разделение мелких и крупных частиц. Крупные частицы элюируются, таким образом, первыми. Мелкие частицы, попавшие в поры НФ, элюируются после крупных.

Разновидностью является – гель хроматография; здесь неподвижная фаза представляет собой набухший гель с порами определенного размера. Гели представляют собой вещества, способные к набуханию и имеющие поры разного размера. В зависимости от поставленных задач применяют гидрофильные и гидрофобные гели. К гидрофильным гелям относятся декстрановые (сефадексы), полиакриламидные (биогели) и некоторые другие гели. К гидрофобным гелям относятся полистирольные (стирогель, порагель), поливинилацетатные гели, пористый силикагель, пористое стекло (порасил). Чаще всего используются декстрановые гели – сефадексы. Их получают из декстрана (С₆Н₁₀О₅)_m, образующегося из сахарозы под действием бактерий и представляющего собой растворимый полисахарид с высокой молекулярной массой (до десяти миллионов). При кислом гидролизе декстрана возникают фракции с разной молекулярной массой. В результате реакции декстрана с эпихлоргидрином образуется нерастворимый в воде гель – сефадекс. Сефадекс для целей гель-хроматографии обычно производят в форме гранул, которыми и заполняют хроматографическую колонку.