Принцип метода

ГЛАВА 1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА

Гель-фильтрация (молекулярно-ситовая хроматография) – особый вид распределительной хроматографии, где разделение основано на размерах молекул разделяемых веществ [4].

Разделение молекул по размерам и форме основано на свойствах молекулярного сита, которыми обладают многие пористые материалы. Неподвижная фаза при гель-фильтрации представлена жидкостью, находящейся внутри пористых, хорошо смачиваемых гранул, заполняющих хроматографическую колонку. Если раствор, содержащий молекулы различной величины, пропускать через такую колонку, молекулы, размер которых превышает размер пор, будут двигаться только в пространстве между частицами, то есть вместе с подвижной фазой, и поэтому не будут задерживаться материалом колонки. Однако молекулы, размеры которых меньше размера пор, диффундируют в частицы и обратно (равномерно распределяются между подвижной и неподвижной фазой), причем вероятность этого повышается с уменьшением их размера, то есть движение по колонке замедляется (рисунок 1). Для молекул промежуточной величины благодаря статическому распределению размеров пор окажется доступной только часть объёма неподвижной фазы, поэтому зона или зоны таких молекул будут мигрировать вдоль колонки быстрее, чем мелкие молекулы, но медленнее, чем крупные. В результате произойдёт фракционирование исходной смеси молекул на зоны в зависимости от их размеров. Молекулы элюируются с такой колонки в порядке уменьшения их размера или, если форма их относительно сходна, в порядке уменьшения молекулярной массы. Смесь молекул нескольких промежуточных размеров в ходе гель-фильтрации разделяется на ряд дискретных групп, различающихся между собой по степени доступности для них объёма внутри гранул. Соответствующие хроматографические зоны мигрируют с различными скоростями и выходят из колонки в виде разделившихся “пиков” [1, 4].