По методу Пятницкого

Ц е л ь р а б о т ы - количественно определить активность пепсина.

Метод Пятницкого - экспресс-метод. В основе метода лежит способность пепсина створаживать белок молока казеиноген. Створаживание молочно-ацетатной смеси пепсином при рН = 4,9 и температуре 25 ⁰С происходит пропорционально его способности переваривать белок. За единицу активности пепсина принимают количество пепсина (мг), которое при рН = 4,9-5,0 и температуре 25 ⁰С створаживает 5 мл молочно-ацетатной смеси данная единица соответствует 0,010 мг кристаллического пепсина). Желудочный сок человека в норме содержит в 1 мл 40-60 единиц пепсина, т.е. в 1 мл желудочного сока содержится 0,4-0,6 мг пепсина.

Оборудование, реактивы:

Пробирки; секундомер; баня водяная; смесь молочно-ацетатная; сок желудочный; препарат пепсина.

Приготовление молочно-ацетатной смеси: Свежее цельное молоко (относительная плотность 1,030) смешивают пополам с ацетатным буфером при

рН = 4,9. В закрытом виде на холоде эта смесь хранится в течение двух недель. Если оставить стоять смесь в делительной воронке, жир легко отделяется и смесь получается удобной для работы. При использовании сухого молока берут ½ столовой ложки его на один стакан теплой воды, кипятят и смешивают пополам с ацетатным буфером при рН = 4,9.

Приготовление ацетатного буфера: готовят два раствора - ацетат натрия (0,2 н) и уксусную кислоту (0,2 н); смешивают 480 мл 0,2 н раствора CH₃COONa и 520 мл 0,2 н раствора CH₃COOH, проверяют рН буфера

(рН = 4,8-4,9).

Порядок выполнения работы:

В одну пробирку помещают 0,1 мл желудочного сока, в другую - 5 мл молочно-ацетатной смеси. Обе пробирки помещают в водяную баню, нагретую до 25 ⁰С на 5 мин. Быстро переливают молочно-ацетатную смесь в пробирку с желудочным соком. Одновременно включают секундомер. Пробирку встряхивают, оставляют в водяной бане, наклоняют ее и следят за появлением на ее стенках первых хлопьев казеина. В момент их появления секундомер останавливают и записывают время створаживания смеси в секундах.

Расчетные формулы: К = 60_*10,

t

где К - число единиц активности пепсина в 1 мл желудочного сока; t - время створаживания,с.

m = K_*0,01,

где m - количество пепсина, соответствующее К единицам активности, мг в 1 мл сока.

П р и м е р 1. Провести анализ желудочного сока, если створаживание 5 мл молочно-ацетатной смеси при добавлении 0,1 мл сока произошло за 15 с.

Определяем, сколько единиц активности пепсина в 0,1 мл желудочного сока: К₁ = 60 = 4 единицы активности в 0,1 мл желудочного сока. 15

Определяем количество единиц активности в 1 мл сока:

К₂ = 4_*10 = 40 единиц активности в 1 мл желудочного сока.

Определяем массу пепсина в 1 мл сока:

M(пепсина) = К_*0,01 = 40 _*0,01 = 0,4 мг пепсина в 1 мл желудочного сока.

Активность пепсина соответствует норме.

П р и м е р 2. Провести анализ препарата пепсина, если исследуемый

0,1 %-й раствор препарата пепсина, взятый в количестве 0,1 мл, произвел створаживание 5 мл молока через 40с.

Одна единица (0,01 мг) створаживает 5 мл молока за 60 с, К единиц или

Х мг - за 40 с.

Х = 60

0,01 40

Х₁ = 0,01_*60 = 0,015 мг в 0,1 мл

или К₁ = 60 = 1,5 единиц активности в 0,1 мл.

В 1,00 мл раствора препарата:

К₂ = 1,5_*10,0 = 15,0 ед. активности пепсина или Х₂ = 0,015_*10,0 = 0,15 мг пепсина в 1 мл.