2015-06-26
1040
Ц е л ь р а б о т ы - определить активность трипсина формольным титрованием.
Активность трипсина определяют по нарастанию аминного азота в казеине, который инкубируется с ферментом.
Оборудование, реактивы:
Колбы конические; пипетки мерные; бюретки; термостат; раствор казеина; раствор трипсина; гидроксид натрия (0,1 н раствор); фенолфталеин; формалин (нейтрализованный раствор формальдегида).
Порядок выполнения работы:
В колбу помещают 50 мл раствора казеина, ставят в термостат при температуре 35…37 0С (оптимальной температуре для проявления максимальной активности фермента). Через 15 мин прибавляют 2 мл раствора трипсина. Сразу отбирают 10 мл раствора для определения аминного азота, далее проводят отбор проб по 10 мл через 30, 60, 90, 120 мин
Для определения аминного азота к 10 мл каждой пробы (всего пять проб) прибавляют 5-6 капель раствора фенолфталеина и нейтрализуют 0,1 н раствором NaOH до слабо-розового окрашивания. Далее к пробе прибавляют 2 мл формалина и снова титруют 0,1 н раствором гидроксида натрия до слабо-розовой окраски раствора.
Обработка результатов:
Содержание аминного азота в 1 мл каждой из пяти проб определяют по формуле: m(N) = 1,4*n(NaOH),
n(пробы)
где n(NaOH) – объем NaOH, пошедший на титрование 10 мл каждого раствора, мл; n(пробы) – объем пробы, взятый для титрования 10 мл; 1,4 - масса N, эквивалентная 1 мл 0,1 н раствора раствора NaOH, мг.
Таблица 17
| Номер пробы | t, мин | n(NaOH), мл | m(N), мг/мл |
Строят график зависимости m(N)= t, откладывая по оси ординат для пяти проб содержание аминного азота (мг/мл), по оси абсцисс - t (мин).
Активность трипсина (мг/мл мин) рассчитывают по формуле:
А(трипсина) = m(N)n – m(N)n-1,
tn – tn-1
где А - активность трипсина; m(N) - содержание аминного азота, мг/мл;
t - время отбора пробы, мин; n = 1-5 - номер пробы.
ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 20
КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ
