Сыворотки крови

Состав фракций белков, выделяемых в биологических жидкостях, в значительной степени зависит от применяемого метода. Основные методы исследования белков сыворотки крови:

· высаливание нейтральными солями,

· электрофоретическое фракционирование,

· иммунологические методы,

· седиментационный способ,

· хроматография,

· гель-фильтрация,

· осаждение этиловым спиртом при низкой температуре.

Наиболее информативными являются электрофоретические методы разделения.

При электрофоретическом разделении через исследуемую сыворотку, помещенную в камеру с буферным раствором, пропускают электрический ток определенной силы и напряжения. В зависимости от электрического заряда и других физических и химических свойств белковые фракции передвигаются к одному из полюсов. Количество выделенных белковых фракций зависит от применяемой поддерживающей среды. В качестве поддерживающей среды при электрофорезе применяют бумагу, пленки ацетат целлюлозы, гели крахмала, сефадекса, полиакриламида, агара и комбинированные среды.

Электрофорез на бумаге. Оценка результатов производится фотометрически после элюирования отдельных фракций белков или на денситометре. Общее количество фракций получается небольшое:

· альбумин, самая большая и наиболее быстро движущаяся к аноду фракция, выявляется обычно в виде одного белка, составляет наиболее заметную фракцию

· α1-глобулины, включает многие индивидуальные белки, в том числе: а1 антитрипсин, серомукоид, антихимотрипсин, транскортин, тироксин-связывающий глобулин,

· α2-глобулины, зона в которой много белков, например, антитромбин 111, эритропоэтин, плазминоген, церулоплазмин, гаптоглобин, холинэстераза, макроглобулин и другие,

· β-глобулины включают трансферрин, фибриноген, транскобаламин, С- реактивный белок, липопротеины,

· γ-глобулины - наиболее медленно движущаяся к аноду фракция содержит иммуноглобулины Ig G, IgA, Ig M, Ig D, Ig E.

Электрофорез на пленках из ацетата целлюлозы, гелях полиакриламида обладает рядом преимуществ: одинаковый размер пор позволяют увеличить четкость разделения, время, необходимое для разделения, значительно меньше, чем при электрофорезе на бумаге. Для получения четкой электрофореграммы достаточно 0,1-0,3 мкл образца.