2015-10-16
526
ЛАБОРАТОРНЫЕ РАБОТЫ ДЛЯ ВЫПОЛНЕНИЯ
НА ПРАКТИЧЕСКИХ ЗАНЯТИЯХ
Раздел I. Химия белков. Ферменты.
Тема 1.1. Структура и свойства аминокислот.
Аминокислотный состав белков.
Тема 1.2. Структура, свойства и функции белков.
Цветные реакции на белки и аминокислоты.
Белки - полимерные соединения, построенные из аминокислот, которые соединены между собой пептидными связями.Аминокислоты – это производные карбоновых кислот, у которых три валентности a – углеродного атома всегда заняты одним атомом водорода (-Н), аминогруппой (-NН2) и карбоксильной группой (-СООН).
Четвёртая валентность может быть занята атомом водорода (глицин) или группировкой атомов, называемой радикалом (-R).
В составе радикалов многие аминокислоты имеют реакционно-способные (функциональные) группы, например сульфгидрильную –SH (цистеин), тиометильную –S- СН3 (метионин), гидроксильную –ОН (серин, треонин, тирозин).
Цель работы - провести цветные реакции с двумя растворами (I и II), один из которых содержит овальбумин (яичный белок), а другой желатину (овальбумин содержит все 20 аминокислот, а желатина только 17), и определить, в каком растворе овальбумин, а в каком – желатина.
Принцип метода. Ряд химических реактивов специфически взаимодействуют с функциональными группами аминокислот (как свободных, так и в составе пептидов или белков), в результате чего развивается специфическое окрашивание. Такие реакции называют цветными реакциями. Интенсивность окраски в цветных реакциях пропорциональна количеству реагирующих функциональных групп. Поэтому цветные реакции могут быть использованы для качественного и количественного определения белков, для определения присутствующих в них аминокислот или для анализа состава белков. Например:
1. с помощью биуретовой реакции определяют наличие пептидных групп в олигопептидах и в белках (универсальная реакция для любых белков);
2. с помощью нингидриновой реакции определяют наличие a- аминогруппв свободных аминокислотах, а также в аминокислотах олигопептидов и белков (универсальная реакция для любых белков);
3. с помощью ксантопротеиновой реакции определяют наличие в белках ароматических аминокислот;
4. с помощью реакции Фоля определяют наличие аминокислоты- цистеина.
Ход определения.
| Реакция | Номер пробирки | Ход работы | Окраска | Чем обусловлена |
| Биуретовая | Раствор I - 5капель, 10%-ный раствор NaOH - 5 капель,1%-ный раствор СuSО4 - 1 капля | |||
| Раствор II - 5капель, 10%-ный раствор NaOH - 5 капель,1%-ный раствор СuSО4 - 1 капля | ||||
| Нингидриновая | Раствор I - 5капель, 1%-ный раствор нингидрина в ацетоне- 2 капли; нагревают | |||
| Раствор II - 5капель, 1%-ный раствор нингидрина в ацетоне- 2 капли; нагревают | ||||
| Ксантопротеиновая | Раствор I - 5капель, HNO3(конц.)- 3 капли; осторожно нагревают | |||
| Раствор II - 5капель, HNO3(конц.)- 3 капли; осторожно нагревают | ||||
| Фоля | Раствор I - 5капель,, 30%-ный раствор NaOH - 5 капель,5%-ный раствор(СН3СОО)2Рb-1 капля; нагревают до кипения | |||
| Раствор II - 5капель, 30%-ный раствор NaOH - 5 капель,5%-ный раствор (СН3СОО)2Рb-1 капля; нагревают до кипения |
Указанные цветные реакции можно проводить на четырёх предметных стёклах*: на один край каждого стекла наносят 1 каплю раствора I, на другой- 1 каплю раствор II.
Биуретовая реакция. К белкам на первом стекле последовательно добавляют 1 каплю10%-ного раствора NaOH и 1 каплю 1%-ного раствора СuSО4, аккуратно перемешивая стеклянной палочкой.
Нингидриновая реакция. К белкам на втором стекле добавляют 1 каплю нингидрина, перемешивают и осторожно нагревают до кипения.
Ксантопротеиновая реакция. К белкам на третьем стекле добавляют 1 каплю концентрированной HNO3, перемешивают и осторожно нагревают.
Реакция Фоля. К белкам на четвёртом стекле добавляют 1 каплю30%-ного раствора NaOH и 1 каплю 5%-ного раствора (СН3СОО)2Рb. Нагревают до кипения.
