Розв’язання

Рестриктаза Hga I впізнає асиметричну послідовність 5′ - GACGC - 3′, а одноланцюгові розриви робить в протилежних ланцюгах ДНК, відступаючи в право на 5 і 10 нуклеотидів. В наслідок цього нуклеотидів є унікальними для кожного сайта рестрикції, існує 4¹⁰ можливих комбінацій. Так що дуже імовірно, що всі 14 фрагментів є унікальними і можуть під дією лігази об’єднатись з утворенням правильної фагової ДНК.

5. Визначте будову полілінкера, який був би сайтом рестрикції для таких рестриктаз:

Hae III; Asu I; Apa I;

Розв’язання.

Hae III - впізнає послідовність з 4 нуклеотидів: GGCC;

Asu I - впізнає послідовність з 5 нуклеотидів: GGNCC;

Apa I - впізнає послідовність з 6 нуклеотидів: GGGCCC;

Таким чином необхідно синтезувати полілінкер з 6 нуклеотидів –GGGCCC.

6. При повному гідролізі ділянки ДНК рестриктазою Eco RI утворилися фрагменти розміром 850 п.н., 500 п.н., 300 п.н.; при повному гідролізі цієї ділянки рестриктазою Bam HI утворилися фрагменти розміром 950 п.н., 600 п.н., 100 п.н.; а при повному гідролізі сумішшю цих двох рестриктаз утворились фрагменти розміром 600 п.н., 400 п.н., 300 п.н. 250 п.н., 100 п.н. Побудуйте рестрикційну карту цієї ділянки ДНК і визначте її довжину.