2015-10-16
358
Щоб побудувати рестрикційну карту, необхідно порівняти розміри фрагментів, одержаних при рестрикції кожним ферментом окремо та їх сумішшю. Покажемо дані гель-електрофорезу схематично:
| Eco RI | Bam HI | Eco RI + Bam HI |
| 950 — | ||
| 850 — | ||
| 600 — | 600 — | |
| 500 — | ||
| 400 — | ||
| 300 — | 300 — | |
| 250 — | ||
| 100 — | 100 — |
Якщо під дією рестриктази утворилися 3 фрагменти, це означає, що в ділянці ДНК було 2 сайти впізнавання для цієї рестриктази. Фрагмент розміром 300 п.о., який утворюється в результаті гідроліза Eco RI, не розщеплюється при гідролізі сумішшю Eco RI + Bam HI, відповідно сайт рестрикції Eco RI знаходиться на відстані 300 п.н. і між ними немає сайта рестрикції Bam HI, а в фрагментах розміром 850 п.н. і 600 п.н. є по одному сайту для Bam HI. На карті це можна відобразити таким чином:
Eco RI Eco RI
 |
500 300 850
При гідролізі сумішшю фрагмента розміром 950 п.н. (утворився при гідролізі Bam HI) утворилися різні фрагменти один з них обов’язково розміром 300 п.н. між Eco RI – сайтами. 950 – 300 = 650 п.н., а це означає, що утворилось три фрагмента (650 = 400 + 250) розмірами 300 п.н., 400 п.н.,
|
|
|
і 250 п.н. На карті це можна відобразити таким чином:
Eco RI Eco RI
|
Bam HI 400 300 250 Bam HI
Bam HI розщеплює Eco RI – фрагмент розміром 850 п.н. на фрагменти довжиною 250 п.н. і 600 п.н., а один з сайтів Eco RI знаходиться на відстані 250 п.н. від сайта Bam HI, відповідно фрагмент 600 п.н. повинен бути кінцевим фрагментом ділянки. Тепер ми бачимо, що Bam HI розщеплює Eco RI – фрагмент довжиною 500 п.н. на два фрагмента розміром 100 п.н. і 400 п.н. і, що один з Eco RI – сайтів знаходиться від Bam HI – сайта на відстані 400 п.н. Таким чином фрагмент розміром 100 п.н. є кінцевим.
Eco RI Eco RI
100 400 300 250 600
Bam HI Bam HI
Довжина цієї ділянки ДНК 1550 п.н.
7. При повному гідролізі плазміди pCEL1 різними рестриктазами та їх комбінаціями одержують такі фрагменти (розміри в т.п.н.):
Eco RI – 6,0; Bam HI – 6,0; Hind III – 6,0; Hae II – 3,0; 2,0; 1,0; Eco RI і Hae II – 2,0; 1,0; Eco RI і Bam HI – 4,5; 1,5; Bam HI і Hind III – 5,0; 1,0; Bam HI і Hae II – 3,0; 2,0 і 0,5; Hae II і Hind III – 3,0; 1,5; 1,0; 0,5. Побудуйте рестрикційну карту.
