PCNA в качестве маркера пролиферации

В последние годы, иммуногистохимическое определение белков, связанных с контролем клеточного цикла широко используется при исследовании развития [14]. Использование PCNA в качестве маркера пролиферации имеет некоторые преимущества по отношению к другим анализам для определения пролиферации клеток, в том числе прямого подсчета числа митозов, или с использованием предшественников ДНК, такие как тритием тимидина (3H-T) или нуклеотидных аналогов, таких как бромдезоксиуридина с обнаружением их включение в ДНК (для обзора см [43]). Митотические фигуры представляют собой лишь краткую фазу клеточного цикла, что делает их использование сложным в изучении пролиферации клеточных популяций с медленным циклом. Аналогично, 3Н-T и BrdU включены только во время S фазы и, для медленно растущих животных, требуют длительной экспозицию к этим веществам для оценки результатов, которые могут повлиять на их жизнеспособность. Напротив, PCNA является иммуноцитохимически обнаруженым на протяжении почти всего клеточного цикла, и было показано, что используется для обнаружения цикл клеток в фиксированных и залитых парафином тканей без предшествующих обработок живых образцов [34]. Несмотря на то, PCNA иммуногистохимии (в отличие от вышеуказанных способов) не позволяет исследовать динамическое развитие клеточных популяций, было сообщено, что в головном мозге рыб костистых рыб, что метит в основном те же самые клетки, и регионы о чем свидетельствуют использование 3H-T или BrdU в качестве маркеров пролиферации [15,36,37,39,56].

4.2. Сроки морфогенеза мозга в костистых рыбах

Наши результаты показывают, что пространственно-временная структура среднего мозга и образования ромбовидного мозга в двух видах проанализированных (в protacanthopterygian С. trutta Fario и acanthopterygian latipes О.) аналогична сообщению в других acanthopterygian костистых рыб, как Мозамбикская тиляпия (тилапия, [2]) и красный пагр (красный морской лещ, [52]) и в ostariophysian Danio rerio (данио, [51,56]), то есть дорсальная часть заднего мозга и среднего мозга структуры (мозжечковая пластина и однослойный оптический Tectum) появится перед ростральным выпячиванием вторичного переднего мозга; зачаток мозжечка valvula видно сразу после;Время появления мозолистого мозжечка и гранулированных возвышений совпадает с тором longitudinalis и предшествует формированию мозжечкового гребня и нескольких слоев в зрительном тектуме.

Даже если морфогенез структур головного мозга, кажется, аналогичен у всех костистых исследованных видов до сих пор, некоторые межвидовые различия существуют и в отношении степени умственного созревания на определенных этапах развития, таких, как в конце гаструляции и инкубационных периодов. Как сообщалось ранее, в форели, формирование нервной стержня происходит во время так называемого периода гаструляции и 40 сомитов уже сформированы, когда бластопор замыкается; в отличие, у видов с маленькими яйцами и быстрого развития, как оризии (в настоящее время результаты) и рыбок данио [51], только эмбриональные оси тела могут быть выделены при завершении гаструляции. Этап phylotypic для развития мозга у костистых рыб соответствует периоду, в котором их мозги показывают максимальную степень сходства с мозгом других позвоночных [24,51]. В оризии [24] и у рыбок данио [51], этап phylotypic был определен как период, когда желудочек появляется в нервном стержне (так он становится нервной трубки), а пять основных подразделений головного мозга установлены. Из наших наблюдений в форели и оризии, это происходит у ранних эмбрионов на 31% и 20% периода яиц, соответственно. У рыбок данио, этот этап происходит при примерно 66% периода яиц, отражая различия в созревании при вылуплении. С этого межвидовые различия в морфологии мозга появляются даже среди костистых рыб (рассмотренных в [24]). После phylotypic стадии, форель и оризии эмбрионы развиваются наиболее крупные зачатки мозга до вылупления (в настоящее результатов, см также [11,12,21,23]). Как и в protacanthopterygian форели и acanthopterygian оризии, в ostariophysian рыбок данио, большая часть массовой организации мозга производиться до вылупления [16,51,56], в то время как количество ядер и объем отдельных частей головного мозга возрастет с молодости до взросления, Тем не менее, в других костистых рыбах, таких как красный acanthopterygian лещ (который достигает такого же размера, как ювенильный ювенильные форели [52]), phylotypic стадии происходит при вылуплении, и большинство структур головного мозга развиваются в течение личиночных (ювенильных стадий). Таким образом, общий анализ мозга морфогенеза показывает, что относительные сроки образования специфических нервных структур, могут значительно варьироваться между видами.