2017-12-14
783
Основными показаниями для назначения лабораторных методов аллергодиагностики, которые проводятся in vitro, являются:
■ ранний детский возраст;
• пациенты с высокой степенью сенсибилизации;
• непрерывно рецидивирующее течение заболевания без периодов ремиссии;
• невозможность отмены антигистаминных и других препаратов;
• поливалентная сенсибилизация, когда отсутствует возможность проведения тестирования in vivo сразу со всеми предполагаемыми аллергенами в ограниченные сроки обследования;
• резко измененная реактивность кожи;
В клинической практике наиболее широко используются следующие методы специфической диагностики, проводимые in vitro:
• метод иммуноферментного анализа (ИФА) для определения специфических IgE;
• радиоаллергосорбентный тест (РАСТ) для выявления специфических IgE);
• непрямой базофильный тест (тест Шелли);
• прямой базофильный тест (тест Шелли);
• реакция специфического высвобождения гистамина из базофилов периферической крови больного (по P.Scov, S.Norne,B.Weeke).
ИФА, радиоаллергосорбентный тест, непрямой и прямой базофильные тесты являются вспомогательными методами специфической аллергодиагностики при реакциях немедленного типа.
Иммуноферментный анализ в настоящее время является одним из распространенных методов исследования. С помощью ИФА производится количественное определение аллергенспецифических IgE в крови больного.
Принцип метода заключается в том, что на первом этапе исследования испытуемый аллерген ковалентно связывается с твердой фазой (бумажный диск, активированный полимер и др.).
При добавлении сыворотки больного происходит связывание аллергена, фиксированного на твердой фазе, с антителом, если в сыворотке присутствуют соответствующие данному аллергену антитела. После отмывания несвязавшихся IgE добавляются антитела против IgE, меченные флуорохромом (пероксидазой хрена, бета-галакгозидазой и др.). Происходит образование комплекса: аллерген на твердой фазе + спе-цифический IgE + антитела анти-IgE (антитела против IgE). Несвязавшиеся антитела удаляются.
Уровни специфического IgE-связывания определяются по интенсивности свечения (реакция оценивается в интервале 1 -4 класса). Чем выше показатель свечения по отношению к негативному контролю (сыворотка, в которой отсутствуют специфические антитела), тем больше специфических IgЕ в сыворотке больного. Специфический характер реакции учитывается на основе позитивного контроля (IgE-связывание интенсивностью 4 класса). Ценность этого метода состоит в том, что для его проведения сразу с большим количеством аллергенов требуется небольшое количество сыворотки.
Радиоаллергосорбентный тест (PACT)
С помощью этого метода также производится количественное определение аллергенспецифических IgE в крови. Аллерген, соединенный ковалентно с бумажным диском, реагирует со специфическим IgE крови больного. После отмывания не-специфического IgE добавляют радиоактивно меченый (12^i) анти-IgE. Образуется комплекс специфический IgE + меченый анти-IgE. Радиоактивность этого комплекса измеряют с помощью гамма-счетчика. Чем больше радиоактивность, тем выше содержание специфического IgE в крови больного.
Для измерения общего и аллерген-специфических IgE используют стандартные наборы (панели) аллергенов.
Для определения IgE в сыворотках крови больных применяют методы, основанные на эффекте хемилюминесценции, Принцип постановки теста такой же, как и при ИФА и радио-аллергосорбентном тесте, однако в качестве индикатора реакции используются фотореагенты (А, В, С, D), свечение которых (тест MAST-CLA(Cll)) регистрируется на пленке Polaroid, на люминометре, на фотометре.
В заключение следует отметить, что для успешной диагностики аллергических заболеваний важнейшее значение имеют правильный анализ и адекватная оценка результатов сбора данных истории жизни и болезни пациента, сбора аллергологического, фармакологического и пищевого анамнеза, нередко позволяющие после первой встречи с больным установить правильный диагноз.
В сложных случаях только комплексное обследование, назначенное с учетом особенностей клинического течения и возможных механизмов формирования аллергического заболевания, сможет разрешить проблемы, возникшие при его диагностике.
