Задача 3. Охарактеризовать методы идентификации бактериальных культур по биохимическим (ферментативным) признакам

Для этого надо знать:

1. Ферментный состав микроорганизмов определяется геномом и является достаточно постоянным признаком, поэтому его определение важно для дифференциации и идентификации микроорганизмов. Наиболее часто определяют ферменты класса гидролаз и оксидоредуктаз.

2. Различия в ферментном составе гидролаз определяют различия таких биохимических свойств бактерий, как: а) сахаролитические свойства – способность разлагать сахара; б) протеолитические свойства – способность расщеплять белки.

Эти свойства выявляются по конечным продуктам расщепления: образование щелочей, H₂S, NH₃ при расщеплении белков; образование кислот, СО₂, Н₂ при сбраживании углеводов.

3. Среди ферментов оксидоредуктаз для идентификации микроорганизмов используют такие ферменты, как каталаза и цитохромоксидаза (ЦО).

Каталаза – фермент, расщепляющий Н₂О₂ с образованием водорода и кислорода. Каталазу содержат аэробы и факультативные анаэробы, но она отсутствует у облигатных анаэробов. Обнаружить каталазу можно по пузырькам кислорода, которые начинают выделяться после смешивания микробных клеток с 1 % р-ром Н₂О₂.

Цитохромоксидаза – фермент, обеспечивающий перенос электронов на кислород в процессе аэробного дыхания. Активность ЦО учитывается при дифференциации бактерий сем. Enterobacteriaceae. Для обнаружения ЦО полоску фильтровальной бумаги смачивают реактивом (1 % спиртовой р-р a-нафтола и 1 % р-р N-диметил-р-фенилендиамин дигидрохлорида в соотношении 2:3) и наносят суточную культуру микроорганизмов. О наличии ЦО судят по синему окрашиванию.

4. Таксономическим признаком для микроорганизмов служит также способность восстанавливать нитраты в нитриты (для определения нитритов используют реактив Грисса), наличие бутандиолового брожения на среде Кларка, для выявления которого используется реакция Фогеса-Проскауэра на ацетоин – промежуточный продукт брожения.