Определение аммиака. Метод Гуафона и Ру

Принцип: к фильтрату кала, полученному, как и при определении органических кислот, прибавляют формалин. Последний соединяется с аминогруппой аммонийных солей, которые при этом теряют свои основные свойства. Освобождающиеся кислые радикалы оттитровываются щелочью. При этом способе определяют суммарно свободный аммиак, связанный аммиак и аминокислоты.

Реактивы и оборудование: 30% водный раствор хлорного железа, 1% спиртовой раствор фенолфталеина, гидрат окиси кальция (гашеная известь) в порошке, 0,1н раствор соляной кислоты, 0,1н раствор едкого натра, формалин; мензурки, химические стаканы, колбы, пипетки глазные и градуированные, бюретки, воронки, стеклянные палочки, шпатели, фильтровальная бумага.

Ход анализа: 25 мл фильтрата (оставшегося от определения органических кислот) нейтрализуют до бледно-розового цвета 0,1н раствором соляной кислоты. Прибавляют 5 мл нейтрализованного формалина (перед употреблением продажный формалин разводят пополам дистиллированной водой и приливают 0,1н раствор щелочи в присутствии фенолфталеина до слабо-розовой окраски) и титруют 0,1н раствором щелочи до исчезающего розового цвета. Количество потраченной 0,1н щелочи на титрование 25 мл фильтрата умножают на 4 и получают количество органических кислот в 100 мл фильтрата, или 10 г кала.

Содержание аммиака соответствует у лошади 2 – 3 мл; у коровы 2 – 5 мл, у телят однодневного возраста – 1,0 – 3,6 мл, в возрасте 2 – 15 дней – 1,6 – 12,0 мл, в возрасте 15 – 30 дней – 2,8 – 10,8 мл, в возрасте старше 30 дней – 0,6 – 6,0 мл; у собак – 3,2 – 8,0 мл.

Диагностическое значение: гниению могут подвергаться белки пищи и белки пищеварительных соков. Практически пищевой белок расщепляется и всасывается в тонкой кишке. Гнилостному распаду чаще подвергается белок, выделяемый стенкой толстой кишки. Поэтому увеличение в кале аммиака может служить указанием на воспалительный процесс в толстой кишке. При колитах, сопровождающихся частой дефекацией, количество аммиака может быть не повышенным, т.к. процесс распада белка при поносах не успевает дойти до стадии образования аммиака.

Кровь.

Принцип: реактивы гемолизируют эритроциты, при этом освобождается гемоглобин. Качественные пробы на присутствие крови основаны на пероксидазном действии гемоглобина, который отнимает водород от некоторых органических соединений (бензидин, пирамидон, гваяковая смола и др.) и передает его перекиси водорода. Получаются окрашенные или флуоресцирующие соединения.

Бензидиновая проба (проба Грегерсена).

Реактивы и оборудование: основной бензидин, раствор 50% уксусной кислоты – перед употреблением немного бензидина (на кончике ножа) растворить в 5 мл уксусной кислоты; 3% раствор перекиси водорода или (лучше) пергидроль, разведенный в 10 раз; предметные стекла, стеклянные палочки, пипетки глазные, шпатели.

Ход исследования: на предметное стекло наносят кал толстым слоем, добавляют 2 – 3 капли раствора бензидина в уксусной кислоте и столько же перекиси водорода. Перемешивают стеклянной палочкой. При положительной реакции на кровь появляется зеленое или сине-зеленое окрашивание в течение первых 2 мин. Окрашивание, наступившее позже, чем через 2 мин, не учитывают. Вместо перекиси водорода можно пользоваться перекисью бария: 0,25 г основного бензидина и 0,1 г перекиси бария растворяют в 5 мл 50% уксусной кислоты. Реактив готовят непосредственно перед употреблением.

Диагностическое значение: положительные реакции на скрытую кровь обнаруживают при язвенных, воспалительных и опухолевых процессах в желудочно-кишечном тракте.

Билирубин.

Принцип: большинство качественных проб на билирубин основано на превращении его в зеленый биливердин под воздействием окислителей (йод, азотистая кислота, трихлоруксусная кислота и др.).

Проба Фуше.

Реактивы и оборудование: реактив Фуше (25 г трихлоруксусной кислоты растворяют в 100 мл дистиллированной воды и добавляют 10 мл 10% раствора полуторахлористого, или хлорного, железа); ступки, пипетки градуированные, химические стаканы, шпатели.

Ход исследования: комочек кала растирают с дистиллированной водой в соотношении 1:20 и прибавляют по каплям реактив Фуше в количестве, не превышающем объем каловой эмульсии. В присутствии билирубина появляется зеленое или синее окрашивание.

Диагностическое значение: проба на билирубин может быть положительной у молодняка в первые дни жизни; у молодняка же более старшего возраста и у взрослых животных билирубин может быть при энтерите и иногда при приеме внутрь антибиотиков. В последнем случае это объясняется угнетением жизнедеятельности кишечной флоры, участвующей в превращении билирубина в стеркобилин.

Стеркобилин. Проба с насыщенным спиртовым раствором уксуснокислого цинка (по Шлезингеру).

Реактивы и оборудование: реактив Шлезингера (10 г уксуснокислого цинка на 100 мл 96° спирта), раствор Люголя (к 2 г калия йодида в колбочке емкостью 50 мл приливают около 1 мл дистиллированной воды, прибавляют 1 г йода кристаллического и воды до метки 50 мл); ступки, пипетки глазные и градуированные, химические стаканы, воронки, фильтры, шпатели.

Ход исследования: комочек кала растирают с приблизительно десятикратным объемом дистиллированной воды, приливают равное количество (предварительно взболтанного) реактива Шлезингера и несколько капель раствора Люголя. Фильтрат дает зеленую флуоресценцию, которая лучше видна на черном фоне.

Диагностическоезначение: повышение стеркобилина наблюдается при усиленном гемолизе эритроцитов (гемолитическая анемия, цирроз печени и др.). Уменьшение содержания стеркобилина происходит при воспалительных процессах желчных путей (холангиты), при паренхиматозных гепатитах. Полное отсутствие стеркобилина в кале (ахоличный кал) имеет место при обтурации желчного протока (желчекаменная болезнь, опухоль), а также в тяжелых случаях острого гепатита.