Реакция на белковую экссудацию (по Трибуле – Вишнякову)

Реактивы и оборудование: 20% раствор уксусной кислоты, 20% раствор трихлоруксусной кислоты; пробирки в штативах, пипетки мерные на 2 и 10 мл, ступки, цилиндры градуированные на 100 мл, весы, разновесы.

Принцип: применяемые реактивы свертывают белок или муцин. Белковые свертки, адсорбируя бактерии и мелкие частицы, оседают на дно, оставляя поверх осадка просветленную жидкость.

Ход исследования: готовят 3% эмульсию кала (3 г кала растирают в ступке с 100 мл дистиллированной воды). Эмульсию разливают в 3 пробирки по 15 мл. В первую пробирку наливают 2 мл трихлоруксусной кислоты, во вторую – 2 мл 20% раствора уксусной кислоты и в третью, контрольную, - 2 мл дистиллированной воды. Пробирки встряхивают и оставляют стоять при комнатной температуре 18 – 24 часа. Регистрируют степень просветления жидкости по сравнению с контрольной пробиркой. Полное просветление (+ + +) – реакция резко положительная; значительное просветление (+ +) – реакция положительная; слабое просветление (+) – реакция слабо положительная.

Диагностическое значение: просветление в первой пробирке указывает на наличие сывороточного белка (растворимого белка) в кале, что свидетельствует о воспалительных процессах слизистой оболочки кишечника, изъязвлениях, сопровождаемых клеточным распадом и кровотечением. Пищевой белок при отсутствии ускоренной перистальтики почти полностью подвергается расщеплению. Следовательно, положительная реакция имеет большое диагностическое значение. Отрицательные результаты имеют относительную ценность, т.к. при наличии воспаления, но при длительном нахождении каловых масс в толстых кишках белок подвергается бактериальному расщеплению. Просветление во второй пробирке указывает на наличие слизи – муцина; в контрольной пробирке жидкость остается мутной.

III. Микроскопическое исследование.

Реактивы и оборудование: раствор Люголя двойной крепости (приготовление см. «Стеркобилин кала»), реактив Саатгофа (10 мл спирта, 90 мл ледяной уксусной кислоты, судана 3 на глаз до получения ярко-красной окраски), реактив Гехта (смешивают перед употреблением равные объемы 1% раствора нейтрального красного и 0,2% раствора бриллиантового зеленого); предметные и покровные стекла, стеклянные палочки, чашки Петри, пипетки глазные, шпатели, пинцеты, микроскопы, спиртовки.

Ход исследования: небольшие комочки кала помещают на предметные стекла и готовят 4 препарата: 1) нативный препарат; 2) с раствором Люголя; 3) с реактивом Саатгофа; 4) с реактивом Гехта.

Для приготовления нативного препарата комочек кала на предметном стекле растирают с 1 – 2 каплями воды до получения равномерной эмульсии и покрывают покровным стеклом. Аналогичным образом готовят второй, третий и четвертый препараты, но вместо воды используют соответствующие реактивы. Видимые примеси в виде слизи, крови, гноя, волокон, пленок помещают на предметное стекло, покрывают покровным стеклом и исследуют под микроскопом. До просмотра нативного препарата просматривают препарат, изготовленный из комочка кала, раздавленного до тонкого слоя между двумя предметными стеклами, в этом препарате определяют количество кормовых остатков и детрита. В нативном препарате обнаруживают большинство элементов кала: растительную клетчатку, мышечные волокна, нейтральный жир, жирные кислоты, мыла, лейкоциты, эритроциты, кишечный эпителий, слизь, кристаллы, яйца гельминтов, простейшие. В препарате с раствором Люголя распознается крахмал и йодофильная флора. Жировые элементы дифференцируют в препаратах с реактивом Саатгофа и Гехта. Элементы, обнаруженные при микроскопическом исследовании кала подразделяют на 4 группы:

1. элементы корма;

2. элементы кишечной стенки;

3. кристаллические образования;

4. флора.

Диагностическоезначение: растительная клетчатка (непереваримая и переваримая). Непереваримая клетчатка (шелуха зерен, кожица, волоски, сосуды и др.) в кишечнике не расщепляется и является составной частью кала здоровых животных. Имеет разнообразные резкие очертания, правильный рисунок, коричневатую, желтую или иную окраску. Переваримая клетчатка состоит из округлых больших клеток, имеющих тонкую оболочку и ячеистое строение. В нормальном кале переваримая клетчатка отсутствует или содержится в виде единичных клеток или клеточных групп. Наличие большого количества переваримой клетчатки в кале свидетельствует о недостаточности пищеварения. В расщеплении ее участвует кишечная флора илео-цекальной области. Обнаруживается в кале при ускоренной эвакуации. При анацидном состоянии в желудке не происходит разрыхления переваримой клетчатки, поэтому в кале она имеет вид больших групп клеток, не разъединенных между собой.

Крахмал распознается в препаратах с раствором Люголя. Может находиться внутри клеток переваримой клетчатки и внеклеточно в виде зерен или осколков различной величины. Под влиянием йода в зависимости от стадии переваривания крахмал приобретает фиолетовый или красноватый цвет. Неизмененный крахмал имеет сине-черный цвет. Без обработки препарата раствором Люголя его распознать трудно. При нормальном пищеварении крахмал отсутствует, т.к. амилолитические ферменты пищеварительного тракта и ферменты бактерий слепой кишки расщепляют крахмал полностью. Присутствие крахмала отмечается при заболеваниях тонкого кишечника и связанной с ними ускоренной эвакуацией и при недостаточности поджелудочной железы.

Мышечные и соединительные волокна – остатки мясного корма плотоядных и всеядных. Непереваренные мышечные волокна желтого цвета, цилиндрической формы, с обрезанными концами, имеют поперечную, реже продольную исчерченность. По мере переваривания мышечные волокна теряют исчерченность. В нормальном кале немного полупереваренных мышечных волокон. Большое количество их, особенно непереваренных, находят при недостаточности поджелудочной железы, понижении секреторной функции желудка, ускоренной перистальтике. Соединительная ткань имеет вид полупрозрачных волокнистых тяжей с нечеткими контурами, слегка преломляет свет. В нормальном кале соединительная ткань не содержится. Ее находят при ахимии, недостаточности поджелудочной железы, при употреблении сырого и плохо прожаренного мяса и при плохом прожевывании пищи.

Жир в кале обнаруживается в виде нейтрального жира, жирных кислот и мыл (соли жирных кислот). Нейтральный жир имеет вид капель, жирные кислоты – вид капель, игольчатых кристаллов и глыбок, мыла – в виде кристаллов, игл и глыбок. Для дифференциации вида жиров готовят 3 препарата: нативный, с реактивом Саатгофа и реактивом Гехта.

Микроскопия нативного препарата дает общее представление о наличии жира (капли, иглы, глыбки).

В препарате с реактивом Саатгофа обнаруживают нейтральный жир, который имеет вид оранжевых, оранжево-красных капель разного размера с гладкими краями. Затем препарат нагревают на спиртовке до кипения, после чего немедленно снимают пинцетом покровное стекло, собирают им на середину расплавившиеся капли, снова накрывают тем же покровным стеклом и микроскопируют в горячем виде и после остывания. В теплом препарате хорошо видны жировые капли красного цвета, характеризующие содержание жировых элементов вообще. Определение отдельных их видов производят в том же препарате, но после его остывания. Те капли, которые в остывшем препарате не изменяют свою форму, относятся к нейтральным жирам (капли округлой формы или «лужицы» с гладкими очертаниями, оранжево-красного цвета), а те капли, которые после охлаждения сморщиваются и становятся бугристыми, а также остроконечные бесцветные кристаллы относятся к жирным кислотам и мылам. Кристаллы жирных кислот имеют форму тонких игл, заостренных с обоих концов, часто они группируются по 2–3–4 вместе, образуя небольшие кучки. Мыла имеют вид кристаллов и желто-коричневых глыбок, не окрашивающихся суданом 3 до нагревания препарата. Кристаллы мыл короткие, по форме напоминают вытянутые маленькие ромбики.

В препарате, окрашенном реактивом Гехта, нейтральный жир и жирные кислоты имеют коричневато-красный, а мыла – зеленый цвет.

У здоровых телят в возрасте от 2 до 10 дней жировые элементы в теплом препарате (с реактивом Саатгофа) представлены единичными жировыми каплями, до 10 в поле зрения, нейтральный жир отсутствует или имеется в небольшом количестве, жирные кислоты и мыла – от небольших до средних количеств (А.М. Смирнов, И.В. Никитина).

У здоровых поросят до 10-дневного возраста обнаруживают по 1 – 2 – 4 жировые капли не в каждом поле зрения микроскопа, нейтральный жир отсутствует или содержится в небольшом количестве (В.П. Лаухин).

У телят и поросят старшего возраста количество жировых элементов значительно меньше. При диспепсии и гастроэнтероколите, особенно при тяжелом их течении, количество жировых элементов в кале резко возрастает.

У взрослых животных показатели количества жировых элементов в кале мало изучены.

Элементы слизистой оболочки кишечника – слизь, эритроциты, лейкоциты, эпителиальные клетки и др. Клеточные элементы обнаруживают в слизи. Для этого отобранные кусочки слизи ополаскивают в физиологическом растворе натрия хлорида и готовят препараты. В препаратах, приготовленных из каловых масс, среди детрита трудно выявить клеточные элементы, т.к. многие полимерные частицы детрита имеют сходство с лейкоцитами, эритроцитами и эпителиальными клетками. Слизь имеет вид светлых тяжей, клеточные элементы на фоне ее хорошо различимы. В норме при микроскопии редко обнаруживается слизь с единичными эпителиальными клетками и лейкоцитами. Количество слизи увеличивается при воспалении слизистой оболочки кишечника. Единичные клетки кишечного эпителия встречаются в нормальном кале. Клетки кишечного эпителия в большом количестве обнаруживаются при воспалительных процессах слизистой оболочки кишечника.

Единичные лейкоциты могут обнаруживаться в нормальном кале. Лейкоциты, расположенные в слизи большими скоплениями, указывают на воспалительный процесс кишечника.

Эритроциты неизмененные в виде желтоватых дисков в норме не встречаются. Обнаруживаются в кале при язвенных, воспалительных процессах, распаде опухолей и прочих поражениях толстого кишечника. При кровотечениях из более высоких отделов кишечника эритроциты разрушаются. В таких случаях вопрос о присутствии эритроцитов (крови) решается путем химической реакции на скрытую кровь.

Кристаллические образования. Кристаллы трипельфосфатов, похожие на «гробовые крышки», встречаются в кале с резко щелочной реакцией при усилении гнилостных процессов в кишечнике.

Щавелевокислый кальций (оксалат кальция) в виде «почтовых конвертов» встречаются в кале при употреблении в пищу большого количества овощей. В норме соляная кислота желудка превращает оксалаты кальция в хлористый кальций. Присутствие их в кале является признаком понижения кислотности желудочного сока.

Кристаллы билирубина в виде очень мелких ромбических или игольчатых образований или зерен оранжевого цвета содержатся в норме меконии новорожденных, фекалиях молодняка в первые дни жизни, а у взрослых животных встречаются при быстром прохождении химуса и кала по кишечнику.

Кристаллы гематоидина игольчатой или ромбической формы красновато-коричневого цвета находят в кале после кровотечений.

Микрофлора. В окрашенных раствором Люголя препаратах йодофильная флора имеет синий, фиолетовый или черный цвет. Йодофильная флора располагается скоплениями и кучками, морфология ее различна (палочки, кокки и др.). В микробах содержатся крахмал или продукты его расщепления, поэтому при добавлении йода получается соответствующее окрашивание. В нормальном кале не содержится. Большое количество йодофильной флоры обнаруживают при недостаточном усвоении углеводов, при усиленных процессах брожения в кишечнике (например, при бродильной диспепсии) и при ускоренной эвакуации кала, дисбактериозах.

Дрожжевые клетки окрашиваются раствором Люголя в желтый или желто-коричневый цвет, имеют овальную форму или округлую форму, располагаются кучками или в виде почкующихся форм. В нормальном кале могут быть в небольшом количестве. Большое количество указывает на несвежесть испражнений, т.к. в этих случаях размножается плесневый гриб. В патологии увеличение гриба в виде почкующихся форм и нитей мицелия наблюдается при кандидамикозах и дисбактериозах.

Контрольные вопросы для самоподготовки.

1) Как определяют у животных прием корма и питья?

2) Приемы исследования ротовой полости у животных.

3) Методы обследования глотки у животных.

4) Способы осмотра и пальпации живота.

5) Методы исследования рубца в условиях хозяйства.

6) Способы диагностики травматического ретикулита.

7) Как исследуют книжку?

8) Расскажите о методах исследования сычуга.

9) Как исследуют кишечник у жвачных животных?

10) Методы исследования желудка и кишечника у лошади.

11) Расскажите о способах исследования желудка и кишечника у свиней и собак.