Калибровочная кривая

При построении калибровочной кривой на ее линейном участке должно находиться несколько точек серийного разведения нормальной плазмы или калибратора. Для получения линейной кривой график обычно строится либо в полулогарифмическом, либо в логарифмическом масштабе. Начальной точ­кой должно являться 100% значение (разведение 1/1), а дальше помещают­ся точки серийных разведении 1/5, 1/10, 1/20. На линейной части калибро­вочной кривой должно находиться также значение 1% активности.

Калибровочная кривая для определения активности II Фактора.

• Определение с использованием АПТВ реакции

о Определение с использованием протромбинового времени

3.52. Что подразумевается под "остаточной активностью"?

В большинстве производимых в настоящее время тест-систем для опреде­ления свертывающей активности образование фибрина происходит после рекальцификации даже без добавления разведения тестируемой плазмы. Это собственное свертывание тест-системы, также известное как остаточная ак­тивность, вызвано тем, что в дефицитной плазме тем не менее присутствуют минимальные количества фактора. Собственное свертывание - это время на­чала сгусткообразования, когда вместо тестируемого образца в дефицитную плазму добавляется буфер. Количественное значение собственной активно­сти тест-системы рассчитывается экстраполяцией из калибровочной кривой. Невозможно определить остаточную активность дефицитной плазмы, исполь­зуя другую дефицитную плазму, так как на результат в этом случае влияет ос­таточная активность последней.

Дефицитная по VIII фактору плазма. Калибровочная кривая и собственная активносгь тест-системы (остаточная активность)

РИСУНОК

Остаточная активность, получаемая методом экстраполяции, имеет крити ческое значение для результатов активности фактора, определяемого с помо­щью данной тест-системы, и может являться причиной расхождения данных активности фактора у одного и того же пациента.

Активность VIII фактора для четырех больных гемофилией А, определенная с помощью двух тест-систем с разной остаточной активностью (А и В)

Тест-система	Остаточная активность, %%	Активность VIII фактора пациента, %%
А	0,19	0,3	0,9	4,7
В	1,9	2,4	5,2

3.53. какие КОМПОНЕНТЫ ГЕМОСТАЗА (МАРКЕРЫ) ИСПОЛЬЗУЮТСЯ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ АКТИВАЦИИ СВЕРТЫВАНИЯ У ПАЦИЕНТОВ С ПОДОЗРЕНИЕМ НА ТРОМБОЗ ИЛИ С ГИПЕРКОАГУЛЯЦИЕЙ?

Для выявления тромботического состояния или состояния гиперкоагуляции используется определение "маркеров активации", так же известных как

"маркеры тромбина" или "молекулярные маркеры". Такими веществами являются:

• фрагменты протромбина F1+2

• тромбин-антитромбиновый комплекс (ТАТ)

• фибрин-мономер

• фибринопептид A (FPA)

• 4 фактор тромбоцитов (PF4)

• b-тромбоглобулин (b-TG)

• Д-Димер

Все эти вещества являются индикаторами тромбинемии, т.е. увеличение уровня этих веществ в крови может рассматриваться как критерий увеличения образования тромбина - ключевого фермента свертывания крови. Таким обра­зом возможно выявление протромботического состояния или гиперкоагуляции и принятие соответствующих профилактических или терапевтических мер.

Между перечисленными маркерами существует определенная разница:

• Так как они характеризуют разные стадии процессов коагуляции, то время их появления в крови тоже разное.

• На выявление этих маркеров влияет их время жизни в кровотоке, напри­мер, FPA имеет время полураспада 3-5 минут и выявляется только в услови­ях постоянного тромбинообразования. F1+2 имеет время жизни 30 минут, ТАТ - 2 часа, а фибрин-мономер живет в кровотоке до нескольких часов.

• Различается клиническая важность отдельных маркеров. В то время как FPA быстро выводится почками, фибрин мономер циркулирует в крови и, до­стигнув определенной концентрации, может вести к нарушениям циркуля­ции.

• Для некоторых маркеров методы исследования являются достаточно слож­ными или длительными.

Образование маркеров активации

РИСУНОК

Тромбин образуется на счет "активации" циркулирующего протромбина, при этом отщепляется фрагмент 1+2 (F1+2). Существует стехиометрическая связь между этим фрагментом и количеством образовавшегося тромбина.

Основное действие тромбина - это образование фибрин-мономеров, кото­рые являются растворимыми сами по себе, но способны к полимеризации. При этом высвобождается фибринопептид A (FPA). Действие тромбина на тромбоциты ведет к высвобождению 4 фактора тромбоцитов (PF4) и b-тромбоглобулина (P-TG).

Свободный тромбин практически не циркулирует в крови. После образова­ния он быстро инактивируется в основном антитромбином III с образованием комплекса ТАТ. Окончательный продукт деградации фибрина А-Димер являет­ся окончательным маркером! указывающим на тромбоэмболический про­цесс. Присутствие Д-Димера говорит о том, что имеет место внутрисосудистое свертывание и следующий за ним вторичный фибринолиз.