В центрифужную пробирку наливают 0,5 мл сыворотки, в которой не наблюдается прямой реакции с диазореактивом Эрлиха. Затем прибавляют 1 мл этилового спирта для осаждения белков. Содержимое пробирки хорошо перемешивают и центрифугируют при 3000 об/мин в течение 10 мин. Центрифугат сливают в другую пробирку, куда добавляют 0,25 мл диазореактива. Появление розовой окраски свидетельствует о наличии в сыворотке крови непрямого билирубина. Анализ проводят в опытной иконтрольной пробах.
Работа №2. Количественное определение билирубина в сыворотке крови по Бокальчуку.
Материальное оснащение.
1. Пробирки простые – 10 шт.
2. Штатив на 5 гнезд - 2 шт.
3. Пипетки на 1 мл - 3 шт.
4. 0,85% раствор хлорида натрия - 10 мл
5. Диазореактив Эрлиха - 3 мл
6. Сыворотка крови больного
желтухой - 2 мл
7. Сыворотка крови здорового
человека - 2 мл
Ход анализа.
В пять пробирок (опытные пробы) наливают по 1 мл физиологического раствора. В первую пробирку прибавляют 1 мл сыворотки крови больного желтухой. Затем в каждую последующую пробирку из предыдущей переносят по 1 мл жидкости; из последней пробирки 1 мл жидкости удаляют. В результате получается ряд разведении (1:2; 1:4; 1:8; 1:16; 1:32) сыворотки крови. Далее во все пробирки добавляют по 0,2 мл диазореактива Эрлиха; содержимое их встряхивают. Через 2-3 мин выясняют кратность разведения сыворотки крови, при которой появляется розовое окрашивание раствора.
|
|
Аналогичное исследование проводят с сывороткой крови здорового человека.
Схема количественного определения билирубина.
Компоненты | Номера пробирок | ||||||||
Примечание | |||||||||
Физраствор | 1 мл | 1 мл | 1 мл | 1 мл | 1 мл | 1 мл | |||
Испытуемая сыворотка | В каждую последующую пробирку, начиная со 2-й, переносится по 1 мл смеси из предыдущей. | Из последней пробирки 1 мл содержимого удаляется | |||||||
Разведение | 1:2 | 1:4 | 1:8 | 1:16 | 1:32 | 1:64 | |||
Диазореактив | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | |||
Концентрацию билирубина в сыворотке (С, мг%) рассчитывают по формуле:
С = A · 0,0156, где
А - степень разведения сыворотки крови;
0,0156 - наименьшее количество билирубина, при
котором диазореакция положительная.
Полученная величина умножается на 100 (коэффициент пересчета на 100 мл сыворотки крови).
Работа №3. Качественное определение билирубина в моче (проба Розена).
Материальное оснащение:
1. Пробирки простые - 2 шт.
2. Пипетка на 2 мл - 1 шт.
3. Пипетка на 5 мл - 1 шт.
4. Штатив на 5 гнезд - 1 шт.
5. 1% спиртовый раствор йода -10 мл
6. Моча больного желтухой - 20 мл
7. Моча здорового человека - 20 мл
Ход анализа:
В пробирку (опытная проба) наливают 5 мл мочи больного желтухой и на нее наслаивают 2 мл 1% спиртового раствора йода. При наличии билирубина в пробе на границе жидкостей появляется зеленое кольцо.
|
|
Аналогичное исследование проводят с мочой здорового человека (контрольная проба).
Работа №4. Качественное определение уробилина в моче (проба Богомолова).
Материальное оснащение:
1. Пробирки простые - 4 шт.
2. Штатив на 5 гнезд - 1 шт.
3. Пипетка на 1 мл - 1 шт.
4. Пипетки на 5 мл -2 шт.
5. Пипетка на 10 мл - 1 шт.
6. Воронки стеклянные - 2 шт.
7. Фильтровальная бумага - 5 шт.
8. Насыщенный водный раствор
медного купороса - 10 мл
9. Соляная кислота концентрированная - 5 мл
10. Хлороформ медицинский (очищенный) - 20 мл
11. Моча больного желтухой - 20 мл
12. Моча здорового человека - 20 мл
Ход анализа.
К 10 мл профильтрованной мочи прибавляют 3 мл раствора медного купороса. При помутнении жидкости (образуется гидрат окиси меди) добавляют 2-3 капли концентрированной соляной кислоты до просветления жидкости. Через 5 мин прибавляют 3 мл хлороформа; смесь несколько раз встряхивают.
При наличии уробилина в пробе хлороформ окрашивается в интервале от бледно-розового до кирпично-красного цвета в зависимости от концентрации этого пигмента в исследуемой моче.
Одновременно изучают оба (опытный и контрольный) образца мочи.
Результаты всех проведенных анализов сопоставляют и обобщают. Исходя из полученных данных, определяют тип желтухи у обследованного больного. В заключении обсуждаются вероятные механизмы развития выявленного типа желтухи.
Работа №5. Решение ситуационных задач по теме.