- Физико-химические свойства белков. Молекулярный вес, размеры и форма молекул. Растворимость, ионизация, гидратация.
- Белки как амфотерные электролиты. Механизм возникновения электрического заряда у белковой молекулы. Факторы, определяющие величину и знак заряда. Понятие изоэлектрической точки белков.
- Обратимое осаждение белков – высаливание; механизм и факторы, вызывающие процесс.
- Лабильность пространственной структуры белков и их денатурация. Факторы, вызывающие денатурацию. Шапероны – класс белков, защищающий другие белки от денатурации в условиях клетки и облегчающие формирование их нативной структуры.
- Методы выделения индивидуальных белков: гель-фильтрация, ионообменная, афинная хроматография.
Методы очистки белков от низкомолекулярных примесей (диализ, ультрафильтрация). Применение.
Базисные знания
Из курса биоорганической химии студенты должны знать:
- физико-химические свойства белков;
- уровни организации белковой молекулы
Из курса биофизики:
- устройство и работу ФЭК, а также порядок работы с ним.
|
|
Практические навыки, которыми должен овладеть студент по теме занятия
а) при разделении белков сыворотки крови на фракции методом высаливания (разделение альбуминов от глобулинов).
б) открывать качественно белок в моче сульфосалициловой
кислотой
Студент должен уметь выполнить работы по осаждению белков плазмы или патологических белков в биологических жидкостях, методы очистки белков, знать лабораторные работы, имеющие практическую значимость, интерпретировать данные анализов
Практическая часть занятия
Высаливание белков сыворотки
Принцип метода: Высаливание белков сыворотки крови (NH4)SО4 может быть использовано для разделения альбуминов от глобулинов в связи с тем, что глобулины осаждаются при 50% насыщении, а альбумины при 100% насыщении (NH4)SО4.
Ход работы. Налить в пробирку 2-3 мл сыворотки крови и добавить равный объем насыщенного раствора (NH4)SО4. Через 15 минут осадок отфильтровать и к фильтрату добавить сухого (NH4)SО4 до полного насыщения. Осадок через 10 минут отфильтровать. Для доказательства обратимости высаливания полученные осадки прямо на фильтрах смочить 2-3 мл дистиллированной воды. Отметить их растворение. С фильтратами проделать биуретовую пробу.
Результат:
Вывод: