Цели и задачи: изучить классификацию, структуру и функции ферментов биологического окисления.
Студент должен:
- знать: классификацию ферментов класса оксидоредуктаз, природу и механизм действия их коферментов, типы катализируемых ими реакций;
- уметь: обнаруживать оксидоредуктазы в биологических объектах, определять активность оксидоредуктаз в биологических жидкостях и тканях;
- владеть: техникой проведения лабораторных работ, методикой сбора и анализа данных эксперимента, методикой расчета активности фермента.
К классу оксидоредуктаз относят ферменты, катализирующие реакции окисления-восстановления:
субстрат + акцептор субстрат (окисленный) + акцептор (восстановленный)
Аэробные дегидрогеназы, или оксидазы, катализируют перенос протонов (электронов) непосредственно на кислород; анаэробные дегидрогеназы ускоряют перенос протонов (электронов) на промежуточный субстрат, но не на кислород. Наиболее распространены оксидоредуктазы, содержащие в качестве активной группы никотинамидадениндинуклеотид, или НАД+. Пиридинферменты также содержат в качестве кофермента никотинамидадениндинуклеотидфосфат (НАДФ+).
Партнером пиридинпротеинов в оксидоредуктазной цепи, как правило, служат флавопротеины - флавинмононуклеотид, ФМН и флавинадениндинуклеотид, ФАД.
Цитохромную систему образуют несколько оксидоредуктаз, имеющих в качестве простетических групп железопорфирины. Цитохромы катализируют перенос только электронов.
К оксидоредуктазам относят также гемсодержащие ферменты каталазу и пероксидазу, катализирующие реакции с участием перекиси водорода.
Реактивы и оборудование: экстракт хрена водный, 0,5% раствор пероксида водорода, спиртовой раствор бензидина, свежее коровье молоко, масло вазелиновое, 0,4% раствор формальдегида, 0,01% раствор метиленового синего, 0,025% раствор рибофлавина, концентрированная соляная кислота, гранулированный цинк, экстракт моркови, 0,1 н раствор перманганата калия, 10% серная кислота, 0,1 н раствор пероксида водорода, штатив лабораторный с пробирками, водяная баня, термометр, пипетки, бюретки, мерные цилиндры, колбы конические на 200 мл.