Опыт 4. Определение каталазы по А.Н. Баху и А.И. Опарину

Для опыта используется экстракт моркови, приготовленный из 2 г свежей моркови в объеме 100 мл.

В 2 конические колбы на 200 мл отбирают пипеткой по 20 мл вытяжки моркови. Одну из колб помещают в кипящую водяную баню на 5 мин (инактивация фермента, контроль), затем охлаждают до комнатной температуры.

В обе колбы добавляют по 25 мл 0,1 н. раствора пероксида водорода. Через 30 мин действие фермента прекращают прибавлением 5 мл 10% раствора серной кислоты.

Растворы титруют 0,1 н. раствором перманганата калия до появления устойчивого в течение примерно 1 мин розового окрашивания. Отмечают объемы раствора перманганата калия, пошедшего на титрование оставшегося пероксида водорода в контрольной и опытной пробах.

Расчет активности фермента в стандартных международных единицах Е ведут в соответствии с уравнением реакции

5Н₂О₂ + 2КМnО₄ + 3H₂SO₄ ® 2MnSO₄ + K₂SO₄ + 5О₂ + 8Н₂О

по формуле:

,

где

V_к – объем 0,1 н. раствора перманганата калия, пошедший на титрование контрольной пробы, мл;

V_оп – объем 0,1 н. раствора перманганата калия, пошедший на титрование опытной пробы, мл;

100 – объем экстракта моркови, мл;

1,7 – масса пероксида водорода, соответствующая 1 мл 0,1 н. раствора перманганата калия, мг;

20 – объем экстракта моркови, взятый для титрования, мл;

2 – масса моркови, г;

30 – продолжительность опыта, мин;

0,034 – масса 1 мкмоль пероксида водорода, мг