Задание к работе

Рассчитать кинетические параметры ферментативной реакции (Константу Михаэлиса, максимальную скорость реакции),используя данные приводимых ниже задач. Вариант задания определяет преподаватель.

1. Ввести исходные данные:

- значение общей концентрации фермента Е;

- табличные данные скорости реакции V и концентрации субстрата S в виде векторов:

2. Построить график зависимости скорости ферментативной реакции V от концентрации субстрата [S].

3. Построить точечный график Лайнуивера-Бэрка

4. На графике Лайнуивера-Бэрка с помощью функций slope и intercept пострить прямые, проходящие через точки, и полученные прямые продлить до пересечения их с осями абсцисс и ординат. Для этого выполните следующую последовательность действий:

4.1. По оси абсцисс визуально определите крайние левую и правую границы диапазона для построенного точечного графика в координатах Лайнуивера-Бэрка. В нашем случае левая граница интервала задается таким образом, чтобы предполагаемая точка пересечения с осью Х входила в этот диапазон. Так, для графика на рисунке 2 выбран диапазон от -20 до 100;

4.2. Над графической областью задайте выбранный диапазон. Для этого введите последовательность символов:

х: -20; 100

Mathcad автоматически преобразует это выражение к следующему виду:

х:=-20..100,

что обозначает: переменная х изменяется в выбранном диапазоне с шагом 1 (он задается по умолчанию). При необходимости задать другой шаг вводится последовательность:

переменная: начальное значение, шаг; конечное значение, если крайнее левое значение больше нуля; или

переменная: начальное значение, начальное значение + шаг; конечное значение, если начальное значение диапазона меньше нуля. Если промежуток слишком мал (<1) или слишком велик (~10⁵), шаг задается обязательно. Например,

запись х:=0,0.1..1 обозначает, диапазон изменяется от 0 до 1 с шагом 0.1;

запись х:=-0.2,-0.19..10 обозначает, диапазон изменяется от -0.2 до 10 с шагом 0.01;

запись х:=-2·10³,100..10⁵ обозначает, диапазон изменяется от -2000 до 10⁵ с шагом 100;

4.3. На графике Лайнуивера-Бэрка проведем прямые через точки с учетом выбранного диапазона.

Для этого последовательно на оси Y через запятую введем переменные 1/V, a×x+b; а на оси X 1/S, x (порядок расположения переменных важен – см. рис. 1).

Если после построения масштаб вашего графика окажется слишком мал, уменьшите интервал, изменив правую границу диапазона.

4.4. Готовые графики отредактируйте: дважды щелкните левой клавишей мыши в области графика; в диалоговом окне Formatting Currently Selected X-Y Plot перейдите на вкладку X-Y Axes; поставьте флажки напротив

· Numbered,

· Autoscale,

· Auto Grid;

в поле Axes Style поставьте флажок напротив Crossed, чтобы отобразить на координатной плоскости пересекающиеся оси.

5. Определить кинетические параметры k₂, K_м, V_мах.

6. Определить параметры ферментативной реакции методом Эди-Хофсти и Хейнса.

Примечание. При построении графиков в этих координатах отношения V/S и S/V– результат поэлементного деления заданных массивов – должны задаваться как вектор. Чтобы ввести знак вектора, установите голубой курсор формул таким образом, чтобы он обрамлял всю дробь (если выделяется только числитель или знаменатель, нажмите [Пробел] для выделения всего выражения), откройте панель инструментов Matrix и выберите кнопку с изображением . Над выражением появится знак вектора. Аналогичные действия выполняются и для аргументов функций slope и intercept в случае поэлементного деления вектора на вектор.