Тема 2: Специальные методы окраски. Устройство биологического микроскопа. Виды микроскопии. Порядок проведения иммерсионной микроскопии

Цель занятия: знать различные методы окраски, используемые для выявления структур бактериальной клетки (спор, капсул, включений) и отдельных групп микроорганизмов; устройство биологического микроскопа и правила работы с ним; виды микроскопии (фазово-контрастная, люминесцентная, темнопольная, электронная); порядок проведения микроскопии с масляной " иммерсией; уметь выявлять наличие капсул у бактерий в препаратах, окрашенных методом Бурри-Гинса; выявлять наличие спор у бактерий в препаратах, окрашенных методом Ожешко; готовить препараты «раздавленной» и «висячей» капли из грибов и бактерий; определять подвижность у бактерий; определять включения бактерий (зерна волютина) в препаратах, окра-

шенных методом Леффлера; проводить микроскопию с масляной иммерсией.

тог

Задание на дом:

I. Вопросы для самоподготовки:

1. Специальные методы окраски для выявления отдельных структур бактериальной клетки (Бурри-Гинса, Ожешко, Леффлера).

2. Методы окраски отдельных групп про- и эукариот.

3. Изучение подвижности микроорганизмов.

4. Виды микроскопии (фазово-контрастная, люминесцентная, темнопольная, электронная). 2,

5. Устройство биологического микроскопа.

6. Порядок проведения иммерсионной микроскопии.

II. Базовый текст 4. 1. Специальные методы окраски для выявления отдельных структур бактерий. Метод Бурри-Гинса. Относится к сложным методам окраски и используется для выявления капсулы бактериальной клетки. Этапы окраски:

1. На предметном стекле смешать каплю взвеси микробных клеток с каплей туши, разведенной 1:10 и при помощи стекла со шлифованным краем сделать мазок таким же образом, как мазок крови, высушить и осторожно фиксировать в пламени горелки или горящим на мазке спиртом.

2. Нанести на мазок водный раствор фуксина на 1-2 мин.

3. Промыть водой, высушить на воздухе. Метод Бурри-Гинса относится к негативным методам окраски: на первом этапе тушь, обтекая капсульные бактерии, создает черный или коричневый фон (соответствующий цвету туши) на котором хорошо видны неокрашенные бактерии, которые на втором этапе окрашиваются в красный цвет, а капсула остается бесцветной. Таким образом, капсулы бактерий хорошо видны на темном фоне туши виде неокрашенных зон вокруг красных бактерий.

Метод Ожешко (Ауэски). Относится к сложным методам окраски и используется для выявления спор бактерий. Этапы окраски:

1. На нефиксированный мазок нанести 0,5% раствор хлористоводородной кислоты (НС1) и подогреть в течение 2-3 мин на пламени (для протравливания плотной оболочки споры) до полного испарения кислоты.

2. Окрасить по методу Циля-Нильсена.

Споры бактерий будут окрашиваться в красный цвет (как кислотоустойчивые бактерии), а

вегетативные формы в синий цвет (как некислотоустойчивые бактерии).

Метод Леффлера. Относится к простым методам окраски и используется для выявления

зерен волютина (цитоплазматических включений полифосфатов) у возбудителя дифтерии

(С.diphtheriae), у которого эти включения располагаются по полюсам клетки. Мазок окрашивают уксусно-кислым метиленовым синим в течение 3-5 минут. Зерна волютина

обладают свойством метахромазии и более интенсивно накапливают краситель — цитоплазма бактерий окрашена в голубой цвет, зерна волютина — в темно-синий.