Возбудитель туляремии. Желточная среда Мак-Коя и Чепина

Желточная среда Мак-Коя и Чепина. Свежие диетические яйца тщательно моют щеткой с мылом в теплой кипяченой воде, промывают чистой кипяченой водой, споласкивают стерильной водой, вытирают досуха стерильными тампона­ми или салфетками и протирают этиловым спиртом. Оба конца яйца слегка фламбируют на горелке. Пинцетом делают на остром конце скорлупы отвер­стие диаметром не менее 2 см, переворачивают яйцо отверстием вниз и, ударяя пинцетом по пуге, быстро выпускают содержимое яйца в стерильную ступку. Белок сливают, его остаток отсасывают пипеткой, а желтки опускают в стериль­ную мензурку, замеряют объем и переливают в колбу с бусами.

На 3 объемные части желтка добавляют 2 части физиологического раствора, перемешивают, разливают в пробирки по 5 мл и свертывают в скошенном виде при 75⁰С в течение 1 ч в первый день и при 82-85⁰С в течение 30 мин на следующий день. Для контроля стерильности среду выдерживают 48 ч при 37⁰С, затем хранят в холодильнике. Во избежание высыхания сред с культурою мик­роба пробки срезают и заливают парафином.

Агар Френсиса. К расплавленному МПА, рН 7,3 добавляют 0,1% цистина и 1 % глюкозы. Кипятят на медленном огне 10-12 мин, охлаждают до 48⁰С, до­бавляют асептически 10% дефибринированной крови кролика, перемешивают, разливают в чашки или в пробирки и скашивают.

Среда Кундина. Состав: агар Д (дрожжевой) 40-50 г, цистеин соляно­кислый или основной 0,5 г, фосфат калия однозамещенный и фосфат калия двузамещенный по ],5 г, активированный уголь (ГОСТ 4453-48) 0,3 г, раствор черного альбумина 20-100 мл (его дозу подбирают к каждой серии агара Д), глюкоза 10 г, дистиллированная вода 1 л. Подготовка раствора черного альбумина - стимулятора роста. Черный альбумин медицинский или технический высшего сорта (ОСТНКПП-415), 50 г, вносят при перемешивании в 500 мл дистиллированной воды, тщательно переме­шиают в течение 40-60 мин до получения однородного раствора: 5 г едкого калия или едкого натра растворяют в 500 мл дистиллирозанной воды; оба рас­твоpa смешивают и кипятят на водяной бане или прогревают в аппарате Коха при 100⁰С 30-40 мин. Готовый стимулятор прозрачен, красного или красно-коричневого цвета.

Приготовление среды. В 1л дистиллированной воды растворяют фосфаты, потом остальные компоненты, кроме глюкозы; расплавляют при подогреве агара Д, стерилизуют при 1 ати 20 мин, добавляют стерильный 20%-ный раствор глю­козы 50 мл, перемешивают, дают отстояться и, не взбалтывая, разливают в чашки.

Среда во много раз эффективнее обычных сред и при высеве единичных кле­ток возбудителя мало уступает биопробе на мышах. При добавлении пеницилли­иа 50 ЕД/мл среда становится элективной, и ее можно использовать для выде­ления микроба туляремии из загрязненного материала.

При подтитровке компонентов проверяют три рецептуры: на 40-50 г ага­ра Д новой серии берут 20, 50 и 100 мл раствора черного альбумина. Контроль­ный посев делают на среду приготовленную из ранее испытанной серии агара Д.