Бактериологический метод исследования

Материал, поступивший для исследования, засевают на основные и элективные питательные среды. Выделив чистую культуру микроорганизмов идентифицируют её по морфологическим, тинкториальным, культуральным, биохимическим, антигенным свойствам. Очень важным является количественное определение микробных агентов каждого вида ДМ установления его этиологической значимости. Бактериолический метод исследования является основным в диагностике инфекционных поражений, поскольку он позволяет определить вид возбудителя и его чувствительность к антибиотикам. Чувствитель­ность к антибиотикам определяют качественным (диффузионным) и количественным методами.

Диско-диффузионный метод. Основан на формировании вокруг бумажного диска, пропитанного антибиотиком, зоны ингибиции по­верхностного роста микроорганизма на плотной питательной среде (ППС). Диск накладывают на поверхность ППС, предварительно засе­янной исследуемым микроорганизмом. Сразу же после нанесения диска на поверхность среды начинается процесс диффузии антибакте­риального препарата (АБП) из диска в среду. В это же время начина­ется процесс адаптации микроорганизма к питательной среде (лаг-фаза роста). Рост микроорганизма (образование газона) начнется на тех участках поверхности среды, где к моменту окончания лаг-фазы концентрация АБП окажется ниже подавляющей. Таким образом, к окончанию периода инкубации на поверхности ППС сформируется сплошной газон культуры микроорганизма, а вокруг диска круглая зона ингибиции роста. Интерпретация результатов оценки чувстви­тельности с помощью диско-диффузионного метода предполагает ис­пользование пограничных значений диаметра зоны ингибиции роста, указанных в прилагаемой «Инструкции».

Метод серийных разведений позволяет определить основной коли­чественный показатель, характеризующий антибактериальную актив­ность антибиотика, - величину минимальной подавляющей концен­трации (МПК). В посуду с питательной средой вносят АБП в возрас­тающих концентрациях (обычно с двукратным шагом). Затем пита­тельную среду засевают культурой исследуемого микроорганизма, после инкубации оценивают наличие или отсутствие видимого роста. Диапазон используемых концентраций АБП зависит от задач иссле­дования (обычно от десятых долей мкг/мл до 100-200 мкг/мл). Дли­тельность инкубации культур для большинства микроорганизмов со­ставляет 18-20 ч. В коммерческих вариантах метода часто используют спектрофотометрическое измерение оптической плотности питатель­ной среды. Поскольку для практических целей важно максимально сократить время исследования, разработаны методы детекции началь­ных стадий бактериального роста. Они основаны на внесении в инку­бационную среду различных индикаторов (в том числе флюоресцент­ных), реагирующих на изменения рН.

Эпсилометрический метод. В качестве носителя используется уз­кая полоска полимера (0,5 х 6,0 см), пропитанная различными концентрациями АБП (от минимальных до максимальных). Ингибиция роста микроорганизма вокруг полоски-носителя происходит только в той зоне, где концентрация антибиотика, диффундирующего из носителя, выше МПК. Результатом диффузии антибиотика в ППС является об­разование вокруг носителя каплевидной зоны ингибиции роста. Вели­чины концентрации антибиотика в каждом участке носителя типо­графским способом нанесены на соответствующем отрезке обращен­ной к исследователю поверхности носителя. Величину МПК учиты­вают в том месте, где граница зоны ингибиции роста вплотную под­ходит к носителю. Детальные инструкции по проведению Е-теста прилагаются изготовителем к набору реактивов.