Микробиологическая диагностика гриппа и других ОРЗ

Материалами для микробиологической диагностики гриппа и других ОРЗ являются мазки из пораженных органов, носоглоточные смывы, соскобы с конъюнктивы, кровь, спинномозговая жидкость, испражнения и образцы, полученные при аутопсии.

Материал для микробиологического исследования следует забирать в оптимальные сроки. К моменту появления первых симптомов заболевания содержание возбудителей в патологическом материале максимально и сохраняется на достаточном уровне всего несколько дней. Пробы для исследования забирают с соблюдением правил асептики, даже если материал сам по себе не является стерильным (фекалии и др.). Рекомендуется использовать стеклянные флаконы или посуду из нетоксичной пластмассы с завинчивающейся пробкой.

Многие возбудители нестойки по внешней среде, поэтому пробы следует сохранять влажными и на холоду, но не замораживать. Для сохранения жизнеспособности вирусов исследуемый материал погружают в стабилизирующую среду, состоящую из раствора Хенкса или гидролизата лактальбумина, обогащенных 5-10% прогретой сыворотки крупного рогатого скота. Для подавления роста сопутствующей микрофлоры к указанным выше растворам добавляют 500 ЕД/мл пенициллина, 200-300 мг/мл стрептомицина и 100-200 ед/мл нистатина.

Носоглоточное отделяемое берут натощак. Больному предлагают прополоскать горло10 мл изотонического раствора хлорида натрия и собрать смыв в широкогорлую банку. Ватными тампонами протирают носовые ходы и заднюю стенку глотки и помещают их в банку со смывом. В лаборатории тампоны отжимают о стенку сосуда и удаляют, а смыв центрифугируют или отстаивают в холодильнике. Для выделения вирусов используют надосадочную жидкость.

Соскобы с конъюнктивы забирают платиновой петлей и делают мазок на предметном стекле. Для выделения возбудителей материал забирают тампоном и помещают его в транспортную среду.

Кровь для серологического исследования берут из вены в объеме 10 мл не менее двух раз: на 1-2 сутки и на 10-20 дни болезни. Если нет уверенности в стерильности сыворотки, то ее лучше заморозить, так как это предотвращает рост контаминирующей микрофлоры и сохраняет специфические антитела, титр которых при длительном хранении при плюсовой температуре может снижаться. Спинномозговую жидкость исследуют при подозрении на менингит или энцефалит.

Пробы фекалий массой 4-8 г помещают в сухой стерильной флакон.

Трупный материал следует забирать как можно раньше, так как титр возбудителей в тканях после смерти падает очень быстро. От трупов берут кусочки легкого, трахеи, бронхов, кишечника, регионарные лимфатические узлы и помещают в стерильную посуду.

Взятые тем или иным способом образцы патологического материала транспортируют в лабораторию в термоконтейнерах, в которых поддерживается температура 2-4^о С. Доставка проб в лабораторию должна осуществляться в максимально короткий срок.

Микробиологическое исследование материалов от больных гриппом и ОРЗ (Приложение 1) включает в себя методы экспресс- и серологической диагностики, а также выделение возбудителей на культурах клеток, куриных эмбрионах, лабораторных животных и питательных средах с последующей идентификацией их на основании комплекса морфологических, тинкториальных, культуральных, биохимических и антигенных признаков.

Методы экспресс-диагностики позволяют получить предварительный ответ в течение нескольких часов с момента поступления проб в лабораторию. С этой целью чаще всего используются реакция иммунофлуоресценции (РИФ) и иммуноферментный анализ (ИФА). Для обнаружения некоторых возбудителей (аденовирусы, реовирусы, хламидии и др.) применяют методы гибридизации нуклеиновых кислот (МГНК) и полимеразной цепной реакции (ПЦР). Для обнаружения внутриклеточных включений при хламидийной инфекции мазки из патологического материала окрашивают по методу Романовского-Гимзе.

Для выделения возбудителей гриппа и других ОРЗ из полученного от больных патологического материала заражают культуры клеток, куриные эмбрионы и лабораторных животных, а также производят посев на питательные среды. После первичного заражения для увеличения концентрации возбудителей проводят 1-3 дополнительных пассажа, а затем осуществляют их идентификацию на основе иммунологических методов исследования (РИФ, РТГА, РН и др.). Результативность методов выделения возбудителей варьирует в широких пределах. Чаще всего положительные результаты могут быть получены в период эпидемических вспышек.

Серологические исследования являются наиболее распространенными методами диагностики гриппа и других ОРЗ в связи с их относительной простотой и доступностью для большинства микробиологических лабораторий. В основе этих методов лежит обнаружение увеличения титров специфических антител в динамике инфекции с помощью различных иммунологических реакций. Особенностью серологических методов исследования является получение результатов спустя 10-20 суток с момента начала заболевания. Вместе с тем, методы биологического обогащения исследуемого материала (заражение культур клеток и др.), несмотря на их сложность, в целом ряде случаев не позволяют получить ответ в более короткие сроки. Чаще всего применяют реакции связывания комплемента (РСК), торможения гемагглютинации (РТГА), нейтрализации (РН) и иммуноферментный анализ. Для постановки реакций используют стандартные антигенные диагностикумы, снабженные наставлением по применению. Диагностическое значение имеет обнаружение четырехкратного и более увеличения титра специфических антител к возбудителю инфекции при исследовании полученных от больного парных сывороток.