2015-06-14
573
Редуктазным методом
Метод основан на восстановлении метиленового голубого окислительно-восстановительными ферментами, выделяемыми в молоко микроорганизмами. По продолжительности обесцвечивания метиленового голубого оценивают бактериальную обсемененность молока.
1) Приготовление основного спиртового раствора метиленового голубого.
10 г метиленового голубого смешивают со 100 мл 96% раствора этилового спирта, ставят в термостат при температуре 37°С на 24 ч, фильтруют в термостате при той же температуре.
Приготовление рабочего раствора метиленового голубого.
Основной раствор помещают в водяную баню при температуре 45°С на 5-10 мин, перемешивают до полного растворения кристаллов. Затем быстро охлаждают до температуры 20°С и 5 мл этого раствора прибавляют к 195 мл дистиллированной кипяченой воды. Смесь хорошо перемешивают. Хранят рабочий раствор при температуре 8-10°С не более 7 суток.
В пробирку наливают 1 мл рабочего раствора метиленового голубого и 20 мл исследуемого молока, закрывают стерильной резиновой пробкой и смешивают путем медленного переворачивания пробирки. Пробирку помещают в редуктазник с температурой воды 37°С, или водяную баню, или термостат. Вода в редуктазнике или водяной бане после погружения пробирок с молоком должна доходить до уровня жидкости в пробирке или быть немного выше. Температуру воды 37°С поддерживают в течение всего времени определения. Момент погружения пробирок в редуктазник считают началом анализа
|
|
|
Наблюдение за изменением окраски проводят через 20 мин, 2 ч и 5 ч 30 мин. Окончанием анализа считают момент обесцвечивания окраски молока. При этом оставшийся кольцеобразный окрашенный сдой вверху и внизу шириной не более 1 см в расчет не принимается. Появление окрашивания молока в этих пробирках при встряхивании не учитывают.
В зависимости от продолжительности обесцвечивания молоко относят к одному из четырех классов по бактериальной обсемененности.
Таблица. 3.
Бактериальная обсемененность молока, определенная редуктазным методом с метиленовым голубым
| Классласс | Качество молока | Продолжительность | Количество бактерий |
| обесцвечивания | в 1 мл молока | ||
| 1 Хорошее | Более 5 ч 30 мин До 500 тыс. | ||
| Удовлетворительное | Более 2 ч до 5 ч 30мин | От 500 тыс.до 4 млн. | |
| Плохое | Более20 мин до 2 ч 20 мин и менее | От 4 до 20 млн. От 20 млн. и более | |
| 4 Очень плохое |
