Фотометрия в УФ-области

В полученных элюентах удаляют органический растворитель, сухие остатки растворяют в 5 мл этанола и снимают спектры поглощения в УФ-области в диапазоне волн от 200-400нм, раствор сравнения 96° этанол. Измерение в тех же условиях повторяют после добавления в кювету, включая и раствор сравнения, по 3 капли насыщенного раствора гидроокиси натрия. После снятия спектра в щелочной среде в те же кюветы добавляют по 5 капель концентрированной серной кислоты и получают спектр в кислой среде. Характер полос поглощения для хлордиазепоксида и его метаболитов представлен в таблице 2.

Таблица 3. Значения Rf и спектральные характеристики хлордиазепоксида и его метаболитов.

При исследовании бензофенонам определяется 60,5 ± 4,3% - 70,0 ± 1,2% от введённого количества. Такой интервал определяемых концентраций зависит от характера анализируемого объекта: степень извлечения значительно снижается при наличии эндогенных соединений липоидной структуры.

При исследовании по неизменному соединению и метаболитам степень извлечения находится в интервале от 55 ± 2,2% до 62 ± 2,8%.

Следует упомянуть, что метаболиты оксазепама (в основном глюкурониды) не экстрагируются хлороформом из водного извлечения, переходит в органическую фазу только нативное соединение. Отсюда следует, что при наличии оксазепама. В отличие от хлордиазепоксида, на хроматограмме появляется лишь окрашенное пятно, Rf которого 0,7 – 0,72. В данном случае это немаловажный факт, т.к.селективность анализа при исследовании хлордиазепоксида по бензофенону отсутствует в отношении оксазепама.

Обнаружение например, хлордиазепоксида в объектах, подвергшихся различной степени гнилостного разложения, при исследовании по продукту гидролиза (АХБ) не вызывает затруднений. 70 - 85% хлордиазепоксида удаётся обнаружить при хранении объектов в течение года.

Отрицательное влияние продуктов гнилостного разложения объектов при исследовании неизменённого хлордиазепроксида и его метаболитов (2 этап) проявляется через 3 недели с момента наступления смерти. При более поздних сроках хранения сводится к анализу продукта гидролиза – 2 – амино 5 – хлорбензофенона (1 этап).

Таблица 4. Значения Rf лекарственных препаратов, имеющих ароматическую аминогруппу, в системе растворителей этилацетат-абсолютный спирт (9:1)