Указания к проведению эксперимента

При гель-фильтрации необходимо пользоваться эффективными колонками, особенно в тех случаях, когда разделяют вещества с близкими значениями K_d. Объём наносимого образца должен быть по возможности небольшим; необходимо следить, чтобы в процессе элюции не происходило чрезмерного разведения или перемешивания уже разделенных компонентов. На основании характеристик различных гелей и исходя из литературных данных о значении K_d для каждого конкретного случая можно выбрать тот или иной тип геля. Целесообразно выбирать гель с наименьшей величиной поглощения воды, т.е. с наибольшим числом поперечных связей.

Перед заполнением колонки гель должен полностью набухнуть, в противном случае снизится скорость протекания растворителя из-за слишком плотной набивки. Колонку заполняют набухшим гелем, затем наносят образец. Элюат, объём которого измеряется с момента внесения в колонку образца, собирают в виде фракций, каждую из которых затем анализируют. Внешний объем определяют как объем, в котором из колонки выходит высокомолекулярное вещество, совершенно не проникающее в частицы геля. Определив объем выхода, можно рассчитать его K_d [3].