2015-06-26
794
Гель-фильтрация используется в основном для очистки высокомолекулярных биологических соединений. С помощью соответствующих гелей проводят разделение и очистку вирусов, белков, ферментов, гормонов, антител, нуклеиновых кислот и полисахаридов. Методом гель-фильтрации можно разделять смеси низкомолекулярных соединений, отделять аминокислоты от пептидов, фракционировать пептиды, образующиеся в результате частичного гидролиза белков, а также олигонуклеотиды из гидролизатов нуклеиновых кислот. Используя данный метод, можно выделять низкомолекулярные декстраны из смесей, например из кукурузного масла [3].
Определение молекулярной массы белка
Для различных типов гелей установлено, что зависимость параметра К от lg М (М-молекулярная масса) представляет собой прямую линию для всех молекул, исключая очень большие и очень маленькие. Параметр К определяется как (Ve – Vo)/Vs, где Ve – объем растворителя, требуемый для элюирования интересующего соединения, Vo – нулевой объем, необходимый для элюирования соединения, не проникающего в неподвижную фазу, Vs – объём неподвижной фазы (в гель-фильтрации это объем геля). Vs измеряют как разность между Vt и Vo, где Vt – общий объём колонки.
Для глобулярных белков и многих углеводов эта методика дает очень надёжные результаты при использовании различных типов сефадекса и биогеля Р. Таким образом, для определения М достаточно пропустить через колонку несколько молекул с известной молекулярной массой, по полученным данным построить прямую линию, после чего М образца можно определить интерполяцией [4].
Типичный пример такого определения с построением калибровочной прямой по молекулярным массам маркерных белков можно найти в работе Кокса, где автор сопоставлял молекулярные массы α-белка из клеток HeLa и гонадотропина из мочи человека (рисунок 4). Определение производилось на колонке с сефадексом G-75 “Superline” (Vt = 675 мл) [1].
