double arrow

Фосфатно-цитратная буферная система

2

Объем, мл
0,1 М лимонная кислота 12,29 7,91 4,55 1,83 0,55
0,2 М Na2HPO4×2H2O 7,71 12,09 15,45 18,17 19,45
pH 4,0 5,8 6,8 7,4 8,0

ВЛИЯНИЕ ТЕМПЕРАТУРЫ НА АКТИВНОСТЬ АМИЛАЗЫ СЛЮНЫ

При низкой температуре ферментативные реакции идут медленно. По мере повышения температуры скорость ферментативных реакций обычно повышается. По достижении некоторого оптимума повышение температуры уже ведет к падению активности фермента и вследствие этого к снижению скорости ферментативных реакций. Так уже при температуре раствора 50-60 °C часто происходит температурная инактивация ферментов. Для огромного большинства ферментов температурный оптимум лежит в пределах 30-40 °C. В зависимости от состояния, в котором находится фермент, температурная устойчивость его не одинакова. Сухие препараты некоторых ферментов выдерживают нагревание даже до 1000 °С без заметной потери своей активности. В растворе же эти ферменты при 100 °C целиком теряют свою каталитическую активность. Низкая температура не инактивирует ферменты. Как правило, она лишь замедляет, или останавливает их действие. В отличие от ферментных, реакции с неорганическими катализаторами ускоряются с повышением температуры.

Оборудование и реактивы: 30% р-р H2SO4, р-р I+KI, 1%-ный р-р крахмала, пробирки, штативы, пипетки на 2 и 5 мл, стаканчики на 50 мл, цилиндры на 25 и 50 мл, фарфоровые чашечки, водяные бани, стаканы, электроплитки, термометры.

Ход работы:

1. Наливают в 5 пробирок по 2 мл 1%-ного раствора крахмала и помещают в различные температурные условия: – в холодную воду, – оставляют при комнатной температуре, – в водяную баню при 37 °С – в водяную баню при 70 °C – в водяную баню при 100 °C.

2. После того, как температура в пробирках уравняется с температурой окружающей среды (примерно через 3 мины) добавляют в каждую пробирку по 1 мл разбавленной в 20 раз слюны. Перемешивают содержимое пробирок и оставляют их на 20 мин (время ориентировочное). Необходимо контролировать ход гидролиза через каждые 5 мин. Для этого, из пробирки, находящейся при температуре 37 °C, берут на фарфоровую чашечку одну каплю жидкости и проводят реакцию на крахмал с йодом. Опыт лучше прекращать при неполном гидролизе крахмала в этой пробирке (бурая или красноватая окраска продуктов реакции). Для прекращения опыта во все пробирки добавляют 2 капли йода.

3. Одновременно проводят опыт с кислотным гидролизом крахмала. Берут 5 пробирок, вносят 2 мл 1%-ного раствора крахмала и помещают в те же температурные условия, что и в первом случае. Добавляют в каждую пробирку по 2 мл 30%-ного раствора серной кислоты, перемешивают и оставляют на 20 мин. По прошествии 20 мин в пробирки добавляют по 2 капли раствора йода. Отмечают визуально особенности гидролиза крахмала под действием амилазы слюны и сравнивают с кислотным гидролизом.

2

Сейчас читают про: