Гидролазы катализируют реакции гидролиза. Подклассы определяются в соответствии с типом связей, подвергающихся гидролизу.
Эстеразы, катализирующие гидролиз сложноэфирных связей. Например, панкреатическая липаза, которая катализирует гидролиз сложноэфирных связей в жирах.
Пептидазы (протеазы), катализирующие гидролитическое расщепление пептидных связей в белках и пептидах. Например, ферменты пищеварительного тракта: 3.4.21.1 химотрипсин, 3.4.21.4 трипсин, 3.4.23.1 пепсин, 3.4.23.15 ренин.
Гликозидазы, катализирующие гидролиз гликозидных связей в полисахаридах. Например, 3.2.1.1 a -амилаза, которая катализирует гидролиз a (1→4)-О-гликозидных связей в полисахаридах.