Цитогенетический метод определения полового хроматина

Назначение: определение полового хроматина человека;

Реагенты: 1% ацетоорсеин;

Принцип: световая микроскопия;

Ход работы:

1. получит соскоб с внутренней стороны щеки шпателем;

2. перенести на предметное стекло;

3. добавить 1 кап 1% ацетоорсеина;

4. накрыть покровным стеклом, сверху – фильтровальной бумагой, умеренно надавить большим пальцем руки на несколько сек;

5. остатки краски удалить (не допускать сдвига покровного стекла);

6. исследовать в световой микроскоп с увеличением 1200 – 1500;

7. половой хроматин образуется в виде тельца Барра, окрашенного в темный цвет, размером около 1 мкм и расположенного под ядерной оболочкой.

Рабочий раствор ацетоорсеина: 1 гр синтетического орсеина растворить в 45 мл ледяной уксусной кислоте, довести до кипения, охладить, отфильтровать, прилить 55 частей дистиллированной воды, довести до кипения, охладить, отфильтровать.

Нормальное количество полового хроматина у женщин встречается в 30% клеток, у мужчин – 0%.

Интерпретация результатов:

Хроматин половой - хроматин, присутствующий только в женских соматических клетках и представляющий одну инактивированную Х-хромосому, которая остается в конденсированной форме. В соматических клетках женщины содержится по одной активной Х-хромосоме. По половому хроматину можно определить пол ребенка до его рождения; такое определение производится путем изучения клеток, полученных в ходе амниоцентеза, или в процессе исследования хорионических ворсинок. Существует два основных вида хроматина:

1) тельце Барра - небольшое образование по краям ядра внутри ядерной оболочки, которое окрашивается при воздействии на него основных красителей;

2) напоминающий барабанные палочки придаток ядра в нейтрофилах;

В условиях патологии могут изменяться размеры телец полового хроматина, а также их число в каждом отдельном ядре и в среднем на 100 ядер. Половой хроматин изучают при цитологическом определении пола (например, при гермафродитизме); для выявления хромосомных болезней (синдром Шерешевского — Тернера, для которого характерно отсутствие полового хроматина у женщин; синдром Клайнфелтера, при котором у мужчин выявляют половой хроматин; синдром трисомии X, при котором в ядре вместо одного тельца полового хроматина выявляют два) (рис. 3); при ряде патологических процессов, особенно злокачественных (в частности, для решения вопроса о виде гормональной терапии при раке молочной железы); для характеристики действия ряда фармакологических средств (например, кортикостероидов — по изменению ими количества клеток, содержащих половой хроматин) и др.

День