Инструкция по применению набора реагентов для скрининга фенилкетонурии (ФКУ) у новорожденных в сухих пятнах крови

День

Определение фенилаланина (ФА) в сухих пятнах крови.

Инструкция по применению набора реагентов для скрининга фенилкетонурии (ФКУ) у новорожденных в сухих пятнах крови.

Назначение: набор предназначен для скрининга ФКУ у новорожденных путем определения уровня ФА в сухих пятнах крови.

Реагенты:

1. реакционный буфер;

2. дипептид;

3. медный реагент;

4. калибровочные пробы;

5. контрольные пробы;

6. планшеты.

Принцип: флуоресцентный

Ход исследования:

1. приготовление рабочего раствора медного реагента:

· в колбу на 500 мл ввести медный концентрат;

· добавить 270 мл дистиллированной воды;

· охладить при t +2 +8 не менее 2 ч;

2. приготовление раствора дипептида:

· во флакон с дипептидом 7 мг добавить 1,4 мл дистиллированной воды;

· размешать;

3. приготовление инкубационной смеси:

· в 10 мл реакционного буфера добавить 0,65 мл дипептида;

· перемешать;

4. в планшет выбиваются стандартные, контрольные, исследуемые образцы;

5. во все лунки планшета внести по 50 мкл 80% этилового спирта:

6. планшет закрывается крышкой и инкубируется при комнатной температуре втечение 30 мин при режиме встряхивания «5-6»;

7. вынуть из каждой лунки диски инъекционной иглой;

8. во все лунки внести по 50 мкл инкубационной смеси;

9. планшет закрывают крышкой и инкубируют при комнатной температуре 1 мин в режиме «5-6»;

10. инкубируют в термостате при +60 1час 20 мин;

11. охладить открытый планшет в морозильной камере при -12 -18 в течение 5 мин;

12. внести по 200 мкл холодного раствора медного реагента;

13. инкубация при комнатной температуре 10-15 мин в режиме «5-6»;

14. счет на анализаторе с измерением флюоресценции;

Нормы: 0,1 – 3,0 мг%

с ФКУ 4 – 8 мг%

Интерпретация результатов:

Обнаружение новорожденных с ФКУ основано на использовании величины предварительно принятой пороговой концентрации ФА, которая устанавливается эмпирически, зная разброс нормальных значений в популяции.

Общепринятым для скрининговых медико-генетических центров в РФ является использование в качестве пороговой концентрации ФА 122 мкмоль/л. Это значение пригодно для оценки уровня ФА в сухих пятнах крови, взятой на 4 – 5 сут после рождения (при преждевременных родах – на 7 – 14 сут жизни).

Концентрация ФА в пробе, превышающая пороговое значение, указывает на возможную патологию, требующую дополнительного лабораторного определения. Все образцы с концентрацией выше 122 мкмоль/л должны быть проверены повторно для исключения ложноположительных результатов. Концентрация ФА в сухих пятнах крови менее 30 мкмоль/л может указывать на недостаточность пропитки крови исследуемого образца.

В случае повторного обнаружения в том же образце крови концентрации ФА выше пороговой скрининг-лаборатория уведомляет поликлинику по месту проживания новорожденного о необходимости повторного взятия крови для количественного определения уровня ФА.

Забор крови производится на бланк, исследованию подвергаются высушенные пятна крови.

Пороговый уровень ФА подвержен колебаниям и устанавливается отдельно для каждой скрининговой лаборатории.

День