Лабораторная диагностика

Материал для исследования. Об установлении случая натуральной оспы необходимо незамедлительно сообщить в министерство здравоохранения и ВОЗ. Пациент должен быть помещен в условия, соответствующие уровню биологической безопасности 4 (УББ-4). Лица, близко контактировавшие с больным, также должны быть изолированы. Соответственно забор материала для исследований, его транспортировка и лабораторные исследования также должны выполняться в условиях, обеспечивающих УББ-4. В биологическом материале вирус остается инфекционным в течение нескольких недель. Объектами для исследования являются биопсийный материал из элементов кожных макуло-папулезных и везикулезно-пустулезных высыпаний, жидкость из участков повреждения, корки. Материал помещают в пробирки, содержащие поддерживающую питательную среду. Короткое время пробы биологического материала можно хранить при 4°С, но предпочтительнее — при -70°С. При пересылке биологического материала необходимо руководствоваться правилами, разработанными ВОЗ для транспортировки биологических агентов особой опасности.

Методы исследований. С целью идентификации и дифференциации видов поксвирусов используют вирусологический, морфологический (включая электронную микроскопию), серологический, молекулярно-биологический и экспериментальный методы.

Для вирусологической диагностики используют заражение 12-дневных куриных эмбрионов и культуры клеток Vero. В процессе репродукции в эпителии хорионаллантоисной оболочки поксвирусы образуют характерные повреждения в виде бляшек (оспины). При культивировании на культуре клеток Vero они вызывают ЦПД. Характер повреждений и предельная температура репродукции вируса позволяют проводить предварительную дифференциацию поксвирусов.

Гистологическое исследование биоптатов из участков поражения кожи также является информативным. При этом выявляется гиперплазия эпидермиса, пенетрация кератиноцитов в дерму. Препараты окрашиваются гематоксилином и эозином. Методом световой микроскопии окрашенных мазков выявляют тельца Пашена-Гварниери (овальные околоядерные ацидофиьные включения). Реакция иммунофлюоресценции используется для выявления вирусных антигенов в мазках-отпечатках. Электронная микроскопия — хороший и быстрый метод выявления поксвирусов. Морфологическая дифференциация вирусов основана на форме и размерах вирусных частиц. Они существенно варьируют по размеру (от 140-230 до 210-380). Иммуноэлектронная микроскопия повышает диагностическую значимость.

Серологическая диагностика используется в качестве ретроспективного метода. Четырехкратное увеличение титров вируснейтрализующих антител в период острой фазы и фазы реконвалесценции является важным диагностическим критерием. В этих целях может использоваться иммуноферментный анализ и метод блоттинга.

Молекулярно-биологический анализ с помощью ПЦР и секвенирование ДНК генома вирусов также могут быть использованы в этих целях. Значение молекулярно-биологических подходов и их сочетание с другими методами значительно повышает эффективность диагностики.