Виявлення ферментів у біологічних об’єктах. Вивчення впливу

Температури та рН середовища на активність ферментів.

Завдання 1. Виявити у слині фермент α-амілазу, який гідролізує крохмаль до дисахариду мальтози та декстринів.

α- Амілаза слини (α-1,4-глюкан-4-глюканогідролаза; КФ 3.2.1.1), яка має відносну групову специфічність, розщеплює α-1,4-глікозидні зв’язки у полісахаридах і не діє на дисахариди.

Принцип. Про активність ферменту судять за його дією на субстрат: зникненням субстрату або появою продуктів його розщеплення. Розщеплення крохмалю виявляють за негативною реакцією з реактивом Люголя.

Хід роботи. У пробірку вносять 0,5–1 мл слини, додають 3–5 мл 1% розчину крохмалю, перемішують і ставлять у термостат при 37 °С на 15–20 хв. Після цього у пробірку вносять 3-4 краплі реактиву Люголя (розчин J₂ в КJ).

Завдання 2. Перевірити термолабільність амілази.

Принцип: той же.

Хід роботи. У пробірку вносять 0,5–1 мл слини, додають 1 мл дис­тильованої води, кип’ятять у полум’ї горілки й охолоджують; потім доливають 3–5 мл 1% розчину крохмалю, перемішують і ставлять у термостат при 37 °С на 15–20 хв. Після цього вносять у пробірку 3–4 краплі реактиву Люголя.

Завдання 3. Перевірити вплив рН середовища на активність амілази.

Принцип: той же.

Хід роботи. У дві пробірки вносять по 0,5–1 мл слини; в першу додають 1 мл 0,4% розчину NaOH, у другу – 1 мл 0,4% НС1; у дві пробірки додають по 3–5 мл 1% розчину крохмалю і ставлять у термостат при 37 °С на 15–20 хв. Враховуючи, що NaOH реагує з J₂ (NaOH+J₂ ® NaJ+Н₂О), перед додаванням реактиву Люголя у пробірку з NaOH вносять 1 мл 0,4% HCI для нейтралізації лугу.

Оформлення роботи: заповнити таблицю.

Практичне значення. Вивчення загальних властивостей необхідно для підбирання оптимальних умов дії ферментів при визначенні їх активності в наукових та клінічних дослідженнях. Невірно пі­дібрані стандартні умови призводять до помилок при діагностуванні захворювань та контролі за якістю ферментативних лікарських засобів.