2015-07-03
2489
8.1.1. Отбор проб материала от людей (трупов), а также подозрительных больных осуществляется в соответствии с требованиями санитарных правил «Безопасность работы с микроорганизмами I - II групп патогенности (опасности). СП 1.3.1285- 03» и «Порядок учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I - IV групп патогенности. СП 1.2.036-95» медицинским персоналом с соблюдением требований противоэпидемического режима (во избежание внутрибольничного заражения). Необходимо использование защитного костюма II типа, дополненного очками, а при вскрытии трупа – костюма I типа, дополненного фартуком, второй парой резиновых перчаток и нарукавниками.
Кровь, взятая у больных в острой стадии заболевания, может содержать вирус в высоких концентрациях, что диктует необходимость дезинфекции пробирок, шприцев, игл и другого лабораторного оборудования немедленно после применения. Использованные шприцы, пробирки, стеклянные палочки, пипетки погружают в раствор дезинфицирующего средства.
Запрещается проводить следующие манипуляции:
1 центрифугирование,
2 встряхивание,
3 пипетирование ртом.
8.1.2. Забор проб материала для лабораторного исследования
Взятие проб крови в остром периоде заболевания должно производиться однократно.
8.1.2.1. Забор проб для вирусологических исследований
Материалом для выделения вируса ККГЛ является:
- цельная кровь,
- плазма,
- сгусток крови,
- секционный материал (печень, легкие, селезенка, почки, головной мозг).
Материал для вирусологических исследований забирают в ранние сроки от начала заболевания (до 7 дня), то есть в период вирусемии. Эффективность выделения вируса в этот период очень высока и приближается к 100 %. При нормализации температуры тела возможность выделения вируса резко снижается, а при появлении в крови вирусспецифических иммуноглобулинов класса G (10 - 14 день от начала болезни) становится невозможной.
Кровь берут, соблюдая правила асептики, из локтевой вены в количестве 5 мл в острый период болезни (первые 5 - 7 сут.) и переносят в пластиковую пробирку с плотно закрывающейся (завинчивающейся) пробкой. Пробирка этикетируется. Этикетка делается из лейкопластыря и наклеивается на пробирку. На этикетке указываются фамилия, имя, отчество больного, вид материала, дата взятия.
Забор секционного материала при вскрытии умерших от КГЛ, а также подозрительных на данную инфекцию проводит патологоанатом или судмедэксперт в присутствии специалиста по особо опасным инфекциям.
Из внутренних органов (сердце, печень, легкие, селезенка, почки, головной мозг) стерильно вырезают кусочек ткани размерами 2-3 см. Стерильным шприцем с длинной иглой или стерильной пастеровской пипеткой с резиновой грушей забирают 8-10 мл крови из сердца, предварительно обеззаразив участок с помощью раскаленного скальпеля. Следует забирать материал из нескольких участков, подвергшихся изменениям, и из участка рядом расположенной ткани, которая выглядит неизмененной. При наличии распада ткани основное внимание обращают на пограничную зону. Забор секционного материала необходимо производить как можно быстрее после смерти больного (не позднее 20 часов при комнатной температуре). Забранный материал помещают в стерильные пластиковые пробирки с плотно закрывающимися (завинчивающимися) пробками, этикетируют.
Для вирусологического исследования консерванты не добавляют и инактивацию материала не проводят.
Каждая проба сопровождается направлением (приложения 6, 7).
Если материал для вирусологических исследований может быть доставлен в лабораторию в течение 2 - 4 ч, то его транспортируют в термосе со льдом. Если время доставки материала превышает 4 ч, его замораживают и доставляют в лабораторию в сосудах Дьюара с жидким азотом или в термоконтейнерах с сухим льдом. Цельную кровь замораживанию не подвергают. Необходимо отделить сыворотку крови от сгустка.
8.1.2.2. Забор проб для молекулярно-генетического исследования
Забор материала осуществляют в соответствии с методическими указаниями «Организация работы при исследованиях методом ПЦР материала, инфицированного микроорганизмами I - II групп патогенности» (М., 2003) и методическими рекомендациями «Забор, транспортировка, хранение клинического материала для ПЦР-диагностики» (М., 2006). Материалом для исследования служат образцы сыворотки и плазмы крови.
Материал для исследования методом ПЦР должен быть взят в первые дни болезни (до 5 - 7 дня), когда вирус циркулирует в крови.
Взятие крови проводят натощак из локтевой вены одноразовой иглой (диаметром 0,8 мм – 1,1 мм) в одноразовый шприц объемом 5 мл или в специальную вакуумную систему типа «Venojekt», «Vakuett®» без антикоагулянта. При взятии шприцем кровь из него аккуратно (без образования пены) переносится в одноразовую пластиковую пробирку.
Сыворотку крови получают, как указано в п. 9.2.3. Переносят сыворотку отдельными наконечниками с аэрозольным барьером в стерильные одноразовые пробирки объёмом 1,5 мл с завинчивающейся крышкой.
Хранят сыворотку крови при температуре от 2 ˚С до 8 ˚С не более 3 сут. при температуре не выше минус 16 ˚С - в течение 1 месяца, при температуре не выше минус 68 ˚С - в течение 1 года. Допускается только однократное замораживание-оттаивание материала. При замораживании клинического материала его транспортировка должна проводиться также в замороженном состоянии.
8.1.2.3. Забор проб для серологической диагностики
Объектом исследования является кровь больного.
Кровь отбирают дважды – на 5 - 7 и на 10 - 14 дни от начала заболевания.
Кровь у больного берут из локтевой вены в стерильную пробирку в количестве 5 - 10 мл, соблюдая правила асептики. Для предотвращения гемолиза сыворотку следует отделить от сгустка. Для этого пробирку с кровью помещают в термостат при температуре 37 °С на один час в скошенном положении, затем образовавшийся сгусток крови обводят стекляннойпалочкой и помещают в вертикальном положении в холодильник при температуре 2 оС - 8 оС на 2 – 3 часа. Полученную сыворотку отбирают пипеткой с резиновой грушей или автоматическим дозатором со стерильным наконечником в пластиковую пробирку, герметично закрывают и направляют в лабораторию для исследования на наличие специфических антител к вирусу ККГЛ. Сгусток сохраняется в пробирке только при первом взятии и может быть использован для вирусологического исследования.
Каждая проба сопровождается направлением (приложение 8).
8.1.3. Транспортировка крови, сывороток и секционного материала в вирусологическую лабораторию
Для передачи в вирусологическую лабораторию в первичной герметично закрывающейся таре пробы помещают во вторичную тару, представляющую собой герметичный металлический или пластиковый пенал.
Транспортировать материал для вирусологического исследования следует в жидком азоте (сосуд Дьюара). При его отсутствии можно использовать термос с сухим льдом или термоконтейнер с хладоагентами, где создана отрицательная температура. Биологический материал от больных (трупа) с подозрением на КГЛ отправляют в вирусологическую лабораторию в течение 24 часов.
Материал с направлением доставляется в специализированную лабораторию (в соответствии со схемой доставки материала). Транспортировка материала осуществляется специально выделенным транспортом в сопровождении медицинского работника.
