Методы специфической лабораторной диагностики материала от больных (трупов)

8.3.1. Выявление РНК вируса ККГЛ методом полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР) проводят классическим методом с электрофоретическим учётом результата реакции в агарозном геле или в режиме реального времени.

РНК из проб материала выделяют с помощью коммерческих наборов для выделения РНК/ДНК в строгом соответствии с прилагаемой инструкцией. Работу проводят согласно требованиям противоэпидемического режима, используя одноразовую пластиковую посуду в боксах II - III классов биологической безопасности. ОТ-ПЦР осуществляют с помощью сертифицированных тест-систем в соответствии с прилагаемыми инструкциями, полученные амплификаты (при использовании классического варианта ОТ-ПЦР) анализируют электрофоретически.

Использование ПЦР-диагностики позволяет не только определить РНК вируса ККГЛ в крови, но и установить уровень (при гибридизационно-флуоресцентном методе учета результатов, используя контрольную панель проб с точно определенной концентрацией вируса) и продолжительность виремии, а также оценить эффективность противовирусной терапии. РНК вируса ККГЛ обнаруживается в крови больных с 1 сут. по 7 сут. заболевания, но в ряде случаев может выявляться до 14 сут. от начала болезни.

Результаты исследования оформляются в соответствии с приложением 9.

8.3.2. Целью серологического исследования являются ранняя диагностика КГЛ с выявлением вирусного антигена и специфических антител класса М (IgМ) и подтверждение диагноза при нарастании уровня антител класса G (IgG) в парных сыворотках крови. При этом используются сертифицированные иммуноферментные тест-системы (ЗАО «Вектор-Бест», г. Кольцово Новосибирской обл. и ЗАО Биотехнологическая компания «Биосервис», г. Боровск Калужской обл.).

Результаты исследования оформляют в соответствии с приложением 10.

8.3.3. Выделение вируса ККГЛ осуществляется в специализированных вирусологических лабораториях, имеющих разрешение на работу с вирусами II группы патогенности. Для выделения вируса используют биопробных животных – 1 - 2-дневных сосунков белых мышей или клеточные линии Vero-E6, SW-13 и др.