Метод основан на отделении небелковых азотистых веществ от белковых путем осаждения последних трихлоруксусной кислотой и определении небелкового азота в фильтрате, полученном после осаждения окислением органического вещества, содержащегося в фильтрате при сжигании его в концентрированной серной кислоте в присутствии катализатора, отгонке образующегося аммиака паром, улавливании его раствором серной кислоты и определении содержания азота методом обратного титрования.
Оборудование и реактивы: весы аналитические класса 2 с пределами измерения от 0 до 200 г; электроплитка бытовая или газовые горелки; баня водяная; холодильник шариковый; воронка капельная; бюретка вместимостью 50 см3 с делениями на 0,1 см3; каплеуловитель; марля медицинская; бумага фильтровальная; колбы для сжигания, вместимостью 100 см3; колбы плоскодонные или круглодонные вместимостью от 500 до 700 см3; колбы плоскодонные вместимостью от 250 до 300 см3; колбы мерные вместимостью 200 или 250 см3; капельница; пипетка вместимостью 10 см3; ступка фарфоровая с пестиком вместимостью 250 см3; вода дистиллированная; кислота трихлоруксусная 200 г/ дм3 (20 %-ная); кислота серная концентрированная и раствор 0,05 моль/ дм3 (0,1 н); натрия гидроксид, раствор 330 г/ дм3 (33 %-ный) прокипяченный и раствор 0,1 моль/ дм3 (0,1 н); медь сернокислая 5-водная; калий сернокислый; метиловый красный, раствор 0,2 г/ дм3 (0,02 %-ный); растворяют 0,02 г метилового красного в 100 см3 спирта 600 г/ дм3 (60 %-ного); индикатор смешанный (Таширо).
|
|
Проведение анализа:
Навеску исследуемого продукта 50 г, взвешенную с погрешностью не более 0,01 г, растирают в ступке со 100 г дистиллированной воды, переносят количественно в мерную колбу вместимостью 250 см3, настаивают 0,5 часа при периодическом взбалтывании, после чего доводят объем жидкости в колбе до метки дистиллированной водой и фильтруют через четыре слоя марли.
В коническую колбу отбирают 100 см3 полученного фильтрата и небольшими порциями при взбалтывании жидкости приливают к ней 25 см3 20 %-ного раствора трихлоруксусной кислоты. Для интенсификации осаждения пробу осторожно подогревают на водяной бане. После 30-минутного отстаивания жидкость отфильтровывают через сухой складчатый фильтр.
В колбу для сжигания (колбу Кьельдаля) вместимостью 100 см3 отбирают пипеткой 10 см3 фильтрата и ведут минерализацию. С этой целью добавляют в колбу Кьельдаля несколько кристаллов медного купороса (от 0,2 до 0,3 г) и приливают от 10 до 20 см3 концентрированной серной кислоты плотностью 1840 кг/ м3.
Затем колбу с содержимым осторожно нагревают в вытяжном шкафу, не допуская разбрызгивания жидкости. Когда содержимое колбы станет однородным, прекращают нагревание, дают остыть, после чего добавляют 0,5 г сернокислого калия и продолжают нагревание до тех пор, пока жидкость в колбе не станет прозрачной, зеленовато-голубой окраски без бурого оттенка. Внутренние стенки колбы должны быть совершенно чистыми. Это достигается осторожным взбалтыванием содержимого колбы для смывания со стенок темных обугленных частиц пробы.
|
|
По окончании сжигания содержимое колбы охлаждают и осторожно количественно переносят в отгонную колбу вместимостью от 500 до 700 см3 (рис.2.1). Колбу для сжигания тщательно ополаскивают, проверяя полноту смывания добавлением 1-2 капель раствора метилового красного.
Общий объем колбы должен быть не более 250 до 300 см3.
Приемником служит коническая колба вместимостью от 250 до 300 см3, в которую из бюретки налито 25-30 см3 раствора серной кислоты 0,05 моль/ дм3 (0,1 н). Конец трубки холодильника должен быть погружен в раствор серной кислоты.
В отгонную колбу осторожно, по стенкам, избегая смешивания жидкостей, приливают от 50 до 70 см3 раствора гидроксида натрия 330 г/ дм3, бросают кусочек лакмусовой бумаги и быстро закрывают ее пробкой, соединенной посредством каплеуловителя с холодильником, осторожно перемешивают содержимое и нагревают. Реакция жидкости в колбе должна быть резко щелочной.
После закипания жидкости в отгонной колбе приемник опускают так, чтобы конец трубки холодильника находился на некотором расстоянии от поверхности раствора, и продолжают отгонку до тех пор, пока не отгонится не менее 2/ 3 жидкости.
Конец отгонки определяют по лакмусовой бумаге. Если отгонка закончена, капля дистиллята не должна вызывать посинения красной лакмусовой бумаги. При появлении в конце отгонки при кипении толчков отгонку прекращают.
По окончании отгонки конец трубки холодильника обмывают водой в приемную колбу и содержащейся в ней избыток серной кислоты оттитровывают раствором гидроксида натрия 0,1 моль/ дм3 в присутствии метилового красного.
Одновременно проводят контрольный анализ без навески исследуемой пробы.
Массовую долю небелкового азота в процентах вычисляют по формуле:
, (3.5)
где - объем раствора гидроксида натрия 0,1 н, пошедший на титрование серной кислоты в контрольном анализе, см3; - объем раствора гидроксида натрия 0,1 н, пошедший на титрование серной кислоты в рабочем анализе, см3; - объем водной вытяжки в мерной колбе, см3; - объем водной вытяжки, взятый для осаждения белков, см3; - объем водной вытяжки, взятый для осаждения белков с учетом объема трихлоруксусной кислоты, см3; - объем фильтрата, взятый для минерализации, см3; - коэффициент пересчета на точный раствор гидроксида натрия, 0,1 н, г; - количество азота эквивалентное 1 см3 гидроксида натрия 0,1 н, г; - навеска исследуемой пробы, г.
Вычисление проводят до второго десятичного знака.